摘要：背景：沉默信息调节因子1（silent information regulator 1,SIRT1）基因是一个与衰老关系密切的基因,可以...背景：沉默信息调节因子1（silent information regulator 1,SIRT1）基因是一个与衰老关系密切的基因,可以通过调节PI3K/AKT、NF-κB等信号通路影响到组织及机体的衰老过程,并参与骨科相关疾病的发生发展。建立慢病毒介导的SIRT1基因表达降低的ATDC5细胞模型,可以为研究SIRT1基因相关的骨科系统疾病如骨关节炎、骨质疏松症等提供实验基础。目的：构建携带小鼠SIRT1基因的RNAi慢病毒载体,将其转染ATDC5细胞系,建立SIRT1基因表达降低的ATDC5细胞模型。方法：根据RNAi序列设计原则设计并合成SIRT1基因的RNAi靶点序列,连接GV248（框架结构：h U6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin）载体,转化后经阳性克隆测序及PCR鉴定,质粒抽提后导入293T细胞,包装慢病毒,取上清检测滴度。将含有小鼠SIRT1基因RNAi的病毒颗粒转染ATDC5细胞系,并于荧光显微镜下进行观察,行RT-PCR检测ATDC5细胞中SIRT1 m RNA的表达情况。结果：经测序、PCR检测可知,SIRT1基因的RNAi靶点序列与GV248载体连接成功,并包装成高滴度的慢病毒。携带小鼠SIRT1基因的RNAi慢病毒感染ATDC5细胞后,荧光显微镜下观察显示感染率较高,RT-PCR检测发现,携带SIRT1基因的慢病毒感染组SIRT1基因m RNA的相对表达量为0.386±0.117,与阴性对照病毒感染组相比有统计学差异（P〈0.05）,敲减效率为61.4%。结论：成功建立SIRT1基因表达降低的ATDC5细胞模型,为研究SIRT1基因相关骨科系统疾病提供实验基础。显示全部
