摘要：组织蛋白酶Z基因(Cathepsin Z gene,CTSZ)是影响猪生长、肉质等性状的一个重要候选基因。本研究以长白猪的...组织蛋白酶Z基因(Cathepsin Z gene,CTSZ)是影响猪生长、肉质等性状的一个重要候选基因。本研究以长白猪的背最长肌为试验材料,采用RT-PCR的方法克隆CTSZ基因CDS序列全长,对该序列进行了生物信息学分析,并构建pEGFP-N1-CTSZ融合表达载体,通过脂质体介导瞬时转染猪成纤维细胞,30h后进行荧光表达检测。结果本试验克隆出猪CTSZ基因CDS全序列912bp,并成功构建pEGFP-N1-CTSZ融合表达载体,瞬时转染后在猪成纤维细胞中表现为绿色荧光蛋白表达。本试验为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。显示全部
摘要：近年来,三唑类杀菌剂成为生产上防治小麦赤霉病（Fusarium Head Blight,FHB）的主要药剂,主要作用于甾醇生...近年来,三唑类杀菌剂成为生产上防治小麦赤霉病（Fusarium Head Blight,FHB）的主要药剂,主要作用于甾醇生物合成中的14α-脱甲基酶（CYP51）,使真菌麦角甾醇的合成受阻,从而破坏细胞膜功能,起到杀菌的功能。本研究的目的是采用结构生物学的方法探究禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）中14α-脱甲基酶（FgCYP51B）的三维结构、生化功能以及其与三唑类杀菌剂的互作机制,进一步阐释禾谷镰刀菌对三唑类杀菌剂潜在的抗性风险。以禾谷镰刀菌（F.graminearum）的cDNA为模板,根据14α-脱甲基酶基因（FgCYP51B）序列设计特异性引物进行PCR扩增,克隆了FgCYP51B基因并构建了3个全长表达载体pHAT2-CYP51B、pETM-20-CYP51B和pETM-30-CYP51B以及3个蛋白截短体表达载体pHAT2-CYP51B50-527,pETM-20-CYP51B50-527和pETM-30-CYP51B50-527,将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21（DE3）和Rosetta（DE3）,并利用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达。结果表明:全长FgCYP51B蛋白在BL21（DE3）和Rosetta（DE3）中均不表达;重组蛋白pHAT2-CYP51B50-527在大肠杆菌中不表达,而重组蛋白pETM-20-CYP51B50-527和pETM-30-CYP51B50-527成功表达,并通过亲和层析、离子交换与分子筛对重组蛋白进行纯化。该蛋白的表达与纯化为其结构功能的研究奠定了基础。显示全部
