摘要：目的：构建PD-1（programmed death receptor 1）全长启动子及不同截短体的报告基因,并对其转录活性进行检...目的：构建PD-1（programmed death receptor 1）全长启动子及不同截短体的报告基因,并对其转录活性进行检测。方法：通过PCR及双酶切方法,从人全血基因组DNA中获得PD-1基因编码序列,包含不同长度碱基的PD-1启动子序列,分别克隆到报告基因pGL3-Basic载体上,构建8个不同长度PD-1启动子的报告基因;用脂质体转染法将8个报告基因分别转染至Jurkat细胞系;采用双萤光素酶报告基因系统评估PD-1启动子的活性。结果：经PCR方法扩增出大小分别为1650、1450、1250、1128、874、674、474和274 bp的不同长度的PD-1启动子序列,测序正确（与GenBank报道一致）,酶切鉴定正确;瞬时转染Jurkat细胞系后经报告基因检测,8个启动子均具有转录活性。结论：构建了PD-1启动子的报告基因,并证实均有转录活性,且以pGL3-1128活性最高,为PD-1的核心启动子,为进一步研究PD-1的转录调控奠定了实验基础。显示全部
摘要：目的鉴定人肺特异性X蛋白（lung specific X protein,LUNX）基因的增强子及其调控活性。方法以人基因组DNA...目的鉴定人肺特异性X蛋白（lung specific X protein,LUNX）基因的增强子及其调控活性。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增生物信息学预测的3个增强子片段（E1：＋3770～＋3959bp;E2：＋6454～＋6555bp;E3：＋14553～＋14652bp）,通过荧光素酶报告基因表达体系检测转录活性。结果 PCR产物经测序证实后,分别定向连接至pGL3-Promoter载体中报告基因启动子上游的Kpn I和Xho I酶切位点和报告基因下游的BamHI和Sal I酶切位点上,经酶切鉴定后,构建了6种荧光素酶报告基因表达体系。以pSV-β-Galactosidase质粒为内对照,瞬时转染HEK293细胞,培养48h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性。当3个DNA片段位于报告基因启动子上游时,均不具有增强转录的能力。将它们分别连接于报告基因下游时,E1和E3所调控的荧光素酶活性分别是对照pGL3-Promoter的2.83倍（P〈0.05）和1.59倍（P〈0.05）。结论 LUNX基因的＋3770～＋3959bp和＋14553～＋14652bp序列具有增强转录的能力,为LUNX表达调控机制的深入研究奠定了基础。显示全部
