摘要：动物体内的肌肉主要分为三类：骨骼肌,心肌和平滑肌,其中骨骼肌约占身体的40%-60%,而骨骼肌是由大量功能不...动物体内的肌肉主要分为三类：骨骼肌,心肌和平滑肌,其中骨骼肌约占身体的40%-60%,而骨骼肌是由大量功能不同的纤维类型组成的。因此,猪肉中不同类型肌纤维的构成比例以及数量的差异,必将会影响肌肉的品质。在过去的研究中,已经形成了对肌肉纤维类型进行分类的较为成熟的方法,研究结果表明可将肌纤维分为四种类型,并用My(myosin heavy chain)Ⅰ,Ⅱa,Ⅱx以及Ⅱb来对不同类型纤维进行标记,且多项研究表明Ⅰ、Ⅱa型纤维含量比例的增大会使肉质朝偏好的方向发展。研究表明生物学通路CaN/NFAT对肌纤维类型的转化起到关键的作用。当细胞质中钙离子浓度增加并达到激活calcineurin的阈值时,能激活下游的转录因子,进而调节MyHCⅡb向Ⅱa型纤维转化。为了研究影响肌肉纤维类型的基因通路中基因表达规律,发现并分离差异表达基因,开展了CaN/NFAT通路中相关基因的表达规律研究以及通路中CAML基因的分离鉴定,结果如下：1、以120日龄大白,通城背最长肌为研究对象,比较了四种肌纤维类型在两个品种间的相对表达量。实验结果显示,MyHCⅠ,Ⅱa在大白中的表达量低于通城猪中的表达量,而MyHCⅡb在大白猪中的表达量高于通城猪。实验结果在一定程度上揭示了通城猪的肉质优于大白猪的原因。2、取大白猪同一个体的心、肝、脾、肺、肾、子宫、卵巢、脂肪、半腱肌、股二头肌、咬肌、背最长肌等组织,采用RT-PCR的方法,对通路各基因进行了组织表达谱分析。实验结果表明,各基因在各组织中广泛表达,这与CaN/NFAT通路广泛参与多项生理活动的事实是相符合的。3、运用实时定量PCR的方法,,检测了CaN/NFAT通路中5个基因在大白猪和通城猪出生后3天、21天、35天、60天、90天和120天六个不同生长发育阶段背最长肌的基因表达情况,结果表明在某些阶段品种间呈现显著或极显著差异。4、以120日龄大白背最长肌(快肌)和半腱肌(慢肌)为材料,比较了通路中各基因在快慢肌之间的相对表达量。结果显示,CAML,NFATc1在半腱肌中的表达量高于其在背最长肌中的表达量,而SERCA2a,CnAβ,MEF2D在背最长肌中的表达量较高。5、分离克隆了CAML基因的全部ORF以及部分5’和3’非翻译区共1683bp的cDNA序列,并对该基因编码的蛋白质序列进行了预测。对该基因编码的蛋白序列在不同物种间进行同源性比较的结果表明,猪的该蛋白序列与人,小鼠,大鼠,牛,猩猩,犬的相似性分别为91%,85%,82%,92%,91%,93%。6、对该基因的基因组序列扩增时,发现CAML第一内含子处存在310bp缺失。经过测序和序列比对分析发现可用PCR方法检测(CAML基因的该突变位点,并建立了CAML基因第一内含子插入／缺失的基因分型方法,三种基因型我们定义为Ⅱ,ID,DD。我们还对该基因突变位点在不同群体中的分布频率进行了比较,并在“大白×梅山”资源家系中进行了性状关联分析。显示全部
