摘要：样品前处理是生物样品分析过程中必不可少的一个环节。面对数量多、珍贵、初始体积小的血液样品,发展便捷、...样品前处理是生物样品分析过程中必不可少的一个环节。面对数量多、珍贵、初始体积小的血液样品,发展便捷、高效的样品前处理手段对于实现快速、准确测定血药浓度有重要实用价值。聚合物整体柱吸管属于一种微型固相萃取装置,对于高效率处理血样具有多种优势。目前,文献报道的在吸管内光引发制备的整体柱体积过小、富集量偏低,柱床通透性不理想、不能直接安装于移液器上通过手动操作移液器完成固相萃取过程。虽然有少数文献对此问题进行了改进,但面临整体柱制备程序繁琐、制备重现性不好的问题。本论文研究针对存在的不足做了如下改进:(1)采用溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的超大分子量二醋酸纤维素(CDA)为致孔剂,制备大的通孔、改善通透性;(2)采用热引发法,制备体积增大的聚合物整体柱,提高负载量;(3)在前面实验研究基础上,采用电子转移引发剂再生(activator regenerated by electron transfer,ARGET)联合原子转移自由基聚合法(atomic transfer radical polymerization,ATRP)在移液器吸管内制备表面限进的大孔聚合物整体柱,最终实现了将整体柱吸管安装于移液器上,通过手动操作直接完成对大鼠血样的固相萃取处理。本论文研究主要内容由以下部分组成:1、绪论主要介绍了本论文的研究背景和目的,并分别从样品前处理技术、固相萃取原理和萃取介质、整体柱的分类、ATPR法的原理及其在合成萃取材料中的应用等方法进行阐述。结合现状,指出本文研究宗旨在于研制新型限进性聚合物整体柱吸管,将其应用于生物样品的预处理中,并阐明论文的研究意义。2、聚(苯乙烯-乙二醇二甲基丙烯酸酯)整体柱的制备及其应用研究采用苯乙烯用作功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯用作交联剂、溶于DMF中的超大分子量CDA作为致孔剂,通过热引发原位聚合法在1000μL移液管吸管(tip)内合成大孔聚合物整体柱。大孔赋予聚合物整体柱床良好的渗透性,该整体柱吸管连接在手持式移液器上,可通过手动排液快速完成固相萃取。经过SPE条件优化,建立tip-SPEHPLC/UV分析方法,对大鼠血浆中的甘草苷、甘草素和异甘草素同时进行检测。采用质控样品对该方法的准确度和精密度进行了验证,其回收率在92.4%~103.6%之间,RSD在0.55~7.3%范围内。在tip-SPE的富集模式下,三种甘草黄酮成分的定量限可达10.5(LQ)、3.50(LQG)和2.34(ILQG)ng/m L。该分析方法成功应用于实际大鼠血浆样品的检测,效果满意。3、聚(甲基丙烯酸-二乙烯基苯)整体柱的制备及其应用研究采用α-甲基丙烯酸作为功能单体、二乙烯基苯作为交联剂,CDA/DMF作为致孔剂,在1000μL聚丙烯管吸管内合成表面具有一定亲水性的聚合物整体柱。得到的整体柱结构均匀、通透性好,表面的部分亲水性使其可以直接对尿样进行固相萃取处理。在优化的固相萃取操作条件下,萃取重现性好,回收率高,整体柱吸管富集能力强。将构建的tip-SPE-HPLC/UV分析方法成功应用于人尿液中黄连碱和小檗碱的同时测定。黄连碱与小檗碱浓度分别在0.100-60.0μg/m L和0.0980-58.4μg/m L呈现良好的线性,相关系数R2大于0.9997,日内、间精密度(RSD)分别在0.31%~3.7%和0.62%~6.1%之间。该分析方法简便、灵敏,能够满足人尿实际样品中的痕量小檗碱和黄连碱的同时检测要求。4、开展了聚(苯乙烯-乙二醇二甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸羟乙酯)表面亲水限进性整体柱吸管的制备及其应用研究。采用苯乙烯用作功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯用作交联剂、CDA/DMF作为致孔剂,通过ARGET-ARTP方法在1000μL聚丙烯吸管内合成疏水性聚合物整体柱萃取介质,然后,进一步利用ARGETARTP法将亲水性功能单体甲基丙烯酸羟乙酯接枝到疏水性整体柱表面,得到表面具有亲水性的限进性聚合物整体柱。表面的亲水性聚甲基丙烯酸羟乙酯链提供亲水性作用,可以阻挡血浆中的蛋白等大分子往整体柱表面扩散、甚至不可逆吸附在整体柱表面,聚甲基丙烯酸羟乙酯链下端的苯乙烯链和柱体表面的聚合物链提供疏水性作用力,可以将随着液体流动、震荡而渗透到下端的小分子药物保留在整体柱上,从而可以将整体柱吸管直接用于处理血浆(清)样品,萃取、富集药物组分,无需事先沉淀蛋白,提高萃取回收率。基于优化的SPE条件,构建了tip-SPE-HPLC/UV法同时对大鼠血浆中大叶钩藤的四种吲哚类生物碱成分进行检测。该方法对质控样品的检测结果表明,方法准确度、精密度、重复性和稳定性都能满足分析要求。该方法已经成功地应用于大鼠灌胃给药大叶钩藤根茎提取液后血浆中钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛碱和柯诺辛碱B的同时测定。更多还原显示全部
摘要：生活越来越好,但烦恼一点都没少,食品安全就是困扰人们的问题之一。食品安全的监控要借助有效的检测方法来...生活越来越好,但烦恼一点都没少,食品安全就是困扰人们的问题之一。食品安全的监控要借助有效的检测方法来实现,在食品分析过程中,样品前处理必不可少。分子印迹技术以其突出的优点常被用于食品分析的样品前处理。传统的分子印迹聚合物（MIP）存在吸附容量低、选择性差、模板渗漏等不足。鉴于此,本文研制了几种改性纳米材料修饰的MIP整体柱,将其用于食品分析,旨在提高样品前处理效率。实验通过漏点曲线和回收率试验考察整体柱的吸附性能与选择性,借助扫描电镜、红外光谱仪等仪器对整体柱进行表征,并验证了整体柱的食品分析应用。本文主要研究内容如下:1.绪论:简要综述了常用样品前处理技术,包括液液萃取、固相萃取和固相微萃取;介绍了分子印迹技术的原理和发展,以及MIP的常见聚合方式和表征手段;接着介绍了分子印迹固相萃取（MISPE）的发展历程,MISPE以其独特的优势常被用于样品前处理,本章介绍了MISPE在食品分析方面的应用,包括真菌毒素分析,兽药残留和农药残留分析。对于MISPE的不足,本章进行详细概括。纳米材料因为具有特殊的性质,常用于修饰MIP,本章介绍了纳米材料的特点和修饰方法以及在MIP方面的应用。最后,基于MISPE的应用现状,提出用改性纳米材料修饰MIP用于食品分析,并简要概括了论文的研究内容,指明了研究意义。2.碳量子点掺杂的分子印迹整体柱的制备及其在黄曲霉素B1（AFB1）检测中的应用:本章的研究以5,7-二甲氧基香豆素作为AFB1的替代模板,甲基丙烯酸（MAA）为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）为交联剂,偶氮二异丁腈（AIBN）为引发剂,将碳量子点（CDs）掺杂在分子印迹预聚液中,采用热引发原位聚合法,制备了CDs掺杂的替代模板分子印迹（CDs-DMIP）整体柱。实验考察了柱子的柱容量、回收率、精密度、富集倍数等性能评价指标,通过扫描电镜（SEM）、傅里叶变换红外光谱（FT-IR）对整体柱的形态、结构进行表征,最后,利用高效液相色谱荧光法（HPLC-FLD）考察了整体柱的除杂和吸附效果,实验表明,CDs-DMIP整体柱对AFB1具有很高的特异性,印迹因子为4.9,首次应用于花生中AFB1的萃取,富集倍数高达71倍,除杂效果良好,检出限为0.118 ng mL-1,可以用于花生中AFB1的痕量分析。3.新型配位印迹聚合物整体柱用于鱼肉中氟甲喹（FLU）的固相萃取:整体柱的合成以FLU-Zn2+为模板,衣康酸和4-乙烯基吡啶作为双功能单体,EDMA为交联剂,AIBN为引发剂,硅烷化石墨烯（SGO）为修饰材料来实现,实验通过响应面法优化了整体柱的合成条件,通过FT-IR和SEM对整体柱进行表征,通过漏点曲线考察整体柱的吸附性能,用HPLC-FLD考察了整体柱的除杂和吸附效果,实验表明,SGO-CIP整体柱对目标物FLU具有很高的特异性,回收率高达95.2%,首次应用于鱼肉中FLU的萃取,富集倍数高达40倍,除杂效果良好,检出限低至1.58 ng mL-1,可以用于鱼肉中FLU的痕量分析。4.基于功能化β-环糊精的分子印迹整体柱的研制与应用:利用合成的硅烷化多壁碳纳米管为修饰材料,以噻菌灵为模板,丙烯酰基-β-环糊精和MAA为双功能单体,EDMA为交联剂,AIBN为引发剂,在混合致孔剂甲苯-甲醇-正十二醇（1:0.5:1.5,v/v/v）中通过原位聚合法聚合于毛细管中,得到分子印迹整体柱,记为β-MMIP,实验通过响应面法优化了整体柱的合成条件,通过漏点曲线考察不同类型整体柱的吸附性能,用HPLC-FLD考察了整体柱的除杂和吸附效果,实验表明,该方法可以同时检测柑橘中的噻菌灵、多菌灵和麦穗宁,回收率均大于84.9%,整体柱特异性强、吸附效果良好、富集倍数大,可用于水果中苯并咪唑类农药残留检测。更多还原显示全部
