摘要：利用PCR技术人工合成编码酿酒酵母泛素样特异性蛋白酶1（Ubiquitin-like specific protease 1，Ulp1）第403...利用PCR技术人工合成编码酿酒酵母泛素样特异性蛋白酶1（Ubiquitin-like specific protease 1，Ulp1）第403到621个氨基酸残基之间的DNA片段Ulp1p，并连接到大肠杆菌表达载体pET-3c中，构建出重组表达质粒pET-Ulp1P。将重组质粒转化至大肠杆菌B121（DE3）中，氨苄青霉素抗性筛选转化子。经IPTG诱导4h后，SDS-PAGE结果显示，Ulp1P为可溶性表达，表达量占菌体总蛋白的50．8％。通过Ni-NTA凝胶亲和层析和G-25凝胶层析联用可以获得纯度大于95％的ulp1P。Western blotting分析表明，Ulp1P能与6xHis抗体产生免疫反应。以重组蛋白SUMO．hEGF（人表皮生长因子）和GST-SUMO-MT（金属硫蛋白）为底物进行酶切分析，结果显示，ulp1P能特异性水解这两种SUMO融合蛋白，其比活为1．386×104U／mg。显示全部
