摘要：以采自广东省水稻瘤矮病的典型病株为材料,通过RT-PCR法扩增和克隆了水稻瘤矮病毒（Rice gall dwarf virus,...以采自广东省水稻瘤矮病的典型病株为材料,通过RT-PCR法扩增和克隆了水稻瘤矮病毒（Rice gall dwarf virus,RGDV）S11组分核苷酸序列全长。序列分析结果表明,RGDV广东分离物S11（登录号EF532326）核苷酸序列全长1168bp,含有一个1068bp的开放阅读框,编码一条355个氨基酸的多肽,推测分子量约40kD,与泰国分离物基因结构基本一致,其核苷酸与氨基酸序列相似性分别为94.3%和98.8%。将广东分离物S11基因克隆至pBV221温敏表达载体上,在大肠杆菌DH5α中实现了高效表达。以诱导蛋白为抗原免疫家兔获得了抗血清。利用ELISA法测定抗血清的效价为1∶4096,Western blot分析结果表明,抗血清能与S11蛋白发生特异血清学反应。这可为进一步研究S11蛋白的结构和功能,揭示其抑制基因沉默的作用机制提供参考。显示全部
摘要：以受番木瓜环斑病毒（Papaya ring spotvirus，PRSV）侵染的番木瓜（Carica papaya）叶片为供试材料，采用R...以受番木瓜环斑病毒（Papaya ring spotvirus，PRSV）侵染的番木瓜（Carica papaya）叶片为供试材料，采用RT—PCR方法克隆其外壳蛋白基因印，并将其连接到原核表达载体pET-28b（＋）上，酶切鉴定及克隆测序确定开放阅读框的正确性，将获得的重组质粒转化大肠杆菌表达宿主菌。通过摸索转化的表达宿主菌种类、IPTG浓度及诱导时间，获得高效表达PRSVcp的条件。SDS-PAGE分析结果表明，CP融合蛋白分子量为36．8kD。以Ni2＋-NTA亲和层析柱纯化的融合蛋白为抗原，免疫注射新西兰大白兔制备得到高效价抗体，间接ELISA测定效价为1：16384。Western blot检测结果表明，制备的抗血清可与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应。通过ID-ELISA检测田间样品证实了制备的抗血清与PRSV侵染病叶发生了良好的特异性反应。本试验为PRSV的快速检测以及PRSV编码蛋白的功能研究奠定了基础。显示全部
摘要：以广东德庆市水稻瘤矮病的典型病株为材料,RT-PCR扩增并克隆了水稻瘤矮病毒（Rice gall dwarf virus,RGDV）...以广东德庆市水稻瘤矮病的典型病株为材料,RT-PCR扩增并克隆了水稻瘤矮病毒（Rice gall dwarf virus,RGDV）的第9组分全长核苷酸序列。生物信息学分析表明,其基因结构特征与已报道的其他分离物基本一致。Pns9蛋白为细胞膜外蛋白,在植物呼肠孤病毒属内没有发现同源蛋白,与霍乱弧菌（Vibrio cholerae）的入口蛋白（portal protein）及姜氏军团菌（Legionella drancourtii LLAP12）的假设蛋白（hypothetical protein LDG3259）分别有33%和24%的氨基酸序列相似性,功能尚待确定。将S9基因克隆至原核表达载体pET-28b（＋）得到高效表达,融合蛋白经亲和层析纯化后,免疫新西兰大白兔制备抗血清。Western blot和ELISA分析表明制备的兔抗为特异抗血清,效价为1∶13 1072。显示全部
