导　　师： 何小维

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 抗体作为免疫检测技术开发的关键原料，其质量直接决定了相应免疫检测方法的性能。对于一些免疫原性低，甚至不具备免疫原性的目标检测物，传统的免疫方式较难以获得高质量的目标抗体。同时在免疫检测过程中，抗原与抗体间的亲和力对所建立的检测方法灵敏度的影响也是不可忽视的。因此，开发高质量检测抗体及明确抗原与抗体间的亲和力对免疫检测方法灵敏度的影响十分有意义。本研究通过应用细胞因子作为分子佐剂辅助免疫制备单克隆抗体，在DNA免疫和皮下免疫两种免疫策略中证实了细胞因子作为分子佐剂对制备单克隆抗体的积极效果。进一步分析了高亲和力抗体所识别的具体抗原表位信息，以及抗原表位氨基酸对抗原-抗体免疫反应亲和力的影响，明确了亲和力在抗原与抗体结合与解离反应过程中的重要作用。通过分析系列与检测抗体具有不同亲和力的竞争抗原对竞争法免疫检测灵敏度的影响，明确了竞争抗原与检测抗体的亲和力和样本中待检抗原与检测抗体的亲和力差异对竞争法免疫检测灵敏度的影响。最后，应用制备得到的高亲和力单克隆抗体开发了抗缪勒氏管激素(Anti-mullerian hormone， AMH )及和肽素(Copeptin ， CPP )全自动化学发光检测试剂(Chemiluminescence immuneassay，CLIA)，试剂具有优异的使用性能，并可用于临床样本的检测。　　主要研究结果如下：　　(1)通过将合成得到的mFlt3L、mGM-CSF、mCCL20基因片段连接到载体pCAGGS上，成功构建重组载体pCAGGS-mFlt3L，pCAGGS-mGM-CSF及pCAGGS-mCCL20。并验证了其可在293F细胞中有效表达目标蛋白，表明可作为分子佐剂进一步实验。　　(2)利用分子佐剂(mFlt3L、mGM-CSF、mCCL20)辅助DNA免疫的策略成功制备了针对AMH的高亲和力抗体，使用KD值小于4nM的两株高亲和力单克隆抗体成功构建了AMH化学发

关 键 词： 细胞因子 单克隆抗体 免疫检测 灵敏度提高 全自动化学发光

领　　域： [医药卫生—诊断学] [医药卫生—临床医学] [理学—分析化学] [理学—化学]