导　　师： 李富荣

学科专业： J0104

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的：建立稳定表达人α1-抗胰蛋白酶（hAAT）基因的胰岛β细胞系（NIT-hAAT），移植到糖尿病小鼠，观察hAAT基因在糖尿病细胞治疗对胰岛β细胞免疫保护和功能的影响。 方法：在成功构建的NIT-hAAT细胞系基础上，采用Western Blotting技术鉴定hAAT的稳定表达。将NIT-hAAT细胞和NIT－1移植到小鼠糖尿病模型左肾包膜下，动态检测小鼠的血糖、血清胰岛素水平，葡萄糖耐量实验和生存期，观察二种移植细胞对糖尿病的治疗效果；同时采用RT-PCR技术检测移植后不同时间点hAAT基因的表达；ELISA和RT-PCR动态检测小鼠血清和移植部位的炎性细胞因子（TNF-α、IFN-γ、IL-1β和IL-2）和抗炎性细胞因子（IL-4）的水平，病理学观察移植部位的炎性变化；在不同时间取各组小鼠脾脏淋巴细胞，采用CCK-8试剂盒测定淋巴细胞的增殖能力；流式细胞术检测Th17/Treg细胞的变化以及骨髓细胞分化为DCs的能力，ELISA检测培养上清IL-10和IL-12含量。 结果： NIT-hAAT移植组hAAT可有效延长NIT-1细胞的存活时间，较对照组单纯移植NIT-1细胞的小鼠血糖水平明显降低，并降至正常血糖水平，生存率明显延长（P<0.05）；在移植后早期，hAAT在体内可稳定表达，并保护移植NIT-1细胞存活发挥胰岛β细胞功能。在免疫保护机制方面，hAAT可抑制炎性细胞因子的合成，促进抗炎性因子的分泌，有效阻止非特异性炎症的发生；病理观察证实hAAT可明显减轻炎性细胞对移植细胞浸润。hAAT可抑制小鼠脾淋巴细胞的增殖，使Treg细胞上调，Th17细胞下调，抑制DCs的分化成熟，发挥对移植胰岛β细胞的免疫保护的作用。 结论： hAAT可明显抑制体内免疫细胞对移植胰岛β细胞免疫攻击和损伤，抑制体内免疫反应，可有效延长β细胞存活时间，从而发挥胰岛β细胞治疗糖尿病的效果。

关 键 词： 抗胰蛋白酶 糖尿病 细胞 细胞移植 免疫抑制

领　　域： [医药卫生—内分泌]