导　　师： 陈金顶

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）是我国法定乙类传染病，属于人畜共患传染病，主要引起病毒性脑炎和繁殖障碍，对人类和动物的健康构成了严重的威胁，也给畜牧业带来了严重的经济损失。传统的检测方法大都存在特异性和敏感性差、操作繁琐、费时费力等缺点，不能满足兽医临床现地检测的需要。为了更好地诊断和监测该病，迫切需要建立一种快速、简便、准确的检测方法。　　近年来，核酸等温扩增技术发展迅速，它摆脱了传统的温度循环仪，可以在短时间内迅速进行扩增反应。重组酶聚合酶等温扩增技术（Recombinase Ploymerase Amplication,RPA）是一种新型核酸等温扩增技术，模拟生物体内DNA复制过程，在37℃—42℃即可对目标片段进行等温扩增，并在20 min完成扩增反应，具有反应迅速、操作简便等技术优点，同时还具有高度特异和敏感的特点。本研究通过将重组酶聚合酶等温扩增技术与封闭式侧向流层析技术（LFD）结合，使JEV病原检测更加易于判定，在基层临床快速检测中具有广泛的应用前景。本研究主要是建立了一种RT-RPA-LFD的快速检测方法，并对其敏感性、特异性以及临床应用的可行性进行评价，其研究内容与结果如下：　　1.建立了乙型脑炎RT-RPA-LFD检测方法:本研究通过12株不同JEV基因的对比，选择E基因的保守区域设计RPA上、下游引物数对，结合2％琼脂糖凝胶体系筛选出最优引物，并扩增出293 bp的目的片段，形成RT-RPA琼脂糖凝胶检测体系。在最优引物之间，设计RPA-nfo长探针（46 bp），并对上游引物和探针进行标记，在RPA-nfo反应体系中加入探针，结合封闭式侧向流层析技术，建立RT-RPA-LFD检测体系。以纯水、细胞、猪脑组织液、蚊子组织液作为阴性对照，进行RT-RPA-LFD反应试纸条均呈现阴性，验证了RT-RPA-LFD方法的�

关 键 词： 猪流行性乙型脑炎 重组酶聚合酶等温扩增 封闭式侧向流层析 临床应用 病原检测

领　　域： [农业科学—临床兽医学] [农业科学—兽医学] [农业科学—畜牧兽医]