导　　师： 杨慧兰

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 单纯疱疹病毒(包括HSV-1和HSV-2两个血清型)是危害人类健康的常见病原体之一。目前对于单纯疱疹病毒性疾病的临床诊断主要以ELISA方法为主,而国内的ELISA诊断试剂盒多以HSV-I、II全病毒或全病毒单克隆抗体为主要试剂,从而影响了了诊断的敏感性和特异性。国外进口试剂盒价格昂贵,不适合大规模检测;对于单纯疱疹病毒感染的治疗,尽管发展了较多的具有一定治疗效果的核苷类似物,从而大大改善了疱疹性感染的临床控制,但是此类化疗药物的应用由于HSV单一或多重耐药株的出现而受限。利用单克隆抗体诊断和治疗病毒引起的疾病给我们提示,针对HSV病毒制备单克隆抗体有望提供一种快速诊断和有效治疗的途径。 在HSV的11种包膜糖蛋白中,HSV-2包膜糖蛋白D(gD)在HSV I型和II型之间具有80％以上的同源性,其也是目前公认的最主要的保护性抗原,在体内可引起高滴度的中和抗体。又因为分子量大的蛋白更容易引起宿主的免疫应答,所以本课题以已构建的pMD-gD质粒为模板,PCR扩增出全长gD基因,克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。之后以纯化的GST-gD融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0瘤细胞融合,ELISA法筛选阳性克隆。亚克隆后建立单克隆细胞株,并测定其分泌的抗体效价,Western Blot鉴定其特异性。研究中获得高效表达GST-gD的原核表达载体,融合蛋白的表达量约占菌体蛋白质总量的30％。以表达的GST-gD融合蛋白免疫小鼠,获得了一株能稳定分泌抗HSV-2 gD单克隆抗体的杂交瘤细胞株E10,Western Blot证实mAb具有较好的特异性。以上研究不仅为HSV感染的抗体疗法奠定了基础,同时也为以重组蛋白gD为抗原的ELISA诊断方法的建立提供了物质基础。

关 键 词： 全长 基因 单克隆抗体 原核表达载体 单纯疱疹病毒 融合蛋白 诊断试剂盒 包膜糖蛋白 敏感性和特异性 诊断和治疗 蛋白免疫 转化大肠杆菌 杂交瘤细胞株 小鼠脾细胞 疱疹病毒感染 多重耐药株 病毒性疾病 保护性抗原 重组蛋白 中和抗体

领　　域： [医药卫生—皮肤病学与性病学] [医药卫生—临床医学]