导　　师： 李扬秋

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的:根据T细胞受体(TCR)基因重排原理,系统地分析脐带血(UCB)T细胞谱系特点等,为UCB T细胞的应用提供更详细和更全面的免疫学特性资料。 方法:(1)利用流式细胞术检测16例UCB T细胞中CD3、CD4、CD8、αβT细胞、γδT细胞各亚群的分布情况,利用RT-PCR-基因扫描法分析10例UCB的TCR Vα/Vβ各亚家族和16例UCB TCR V/Vδ各亚家族的分布和克隆性情况;并利用实时荧光定量RT-PCR检测16例UCB TCR V基因3个亚家族的表达水平。(2)采用T淋巴细胞培养结合PCR-基因扫描法,分析3例UCB经rhIL-2、PHA、CML细胞和PML-RARα多肽等体外诱导前后其TCR Vβ各亚家族的选择性增殖情况。(3)采用MACs法分选12例UCB的CD4和CD8T细胞,然后利用实时荧光定量RT-PCR分析60例UCB单个核细胞以及12例纯化后UCB CD4和CD8T细胞中TCRζ基因的表达水平及多态性情况。60例健康成人外周血作为对照。 结果:(1) UCB中CD3T细胞、CD3CD8T细胞、CD3TCRαβT细胞、CD3TCRδT细胞在淋巴细胞中的比值均显著低于健康成人外周血,而其CD3TCRαβT细胞在CD3T细胞中的比值显著高于成人外周血,CD3TCRδT细胞在CD3T细胞中所占的比例则显著低于外周血。(2) UCB中TCR Vα/Vβ和V/Vδ亚家族的分布均存在选择性,克隆性分析显示UCB中的Vα/Vβ亚家族主要呈多克隆性,而V/Vδ则在不同亚家族中出现克隆性增殖的T细胞,这种寡克隆现象也见于极个别的Vα亚家族。定量结果显示:V基因3个亚家族在UCB中的分布为VⅠ＞VⅢ＞VⅡ,与外周血(VⅡ＞VⅠ＞VⅢ)的分布模式不同。(3)经rhIL-2和PHA分别刺激2周后,UCB TCR Vβ亚家族T细胞表达全部24个Vβ亚家族,并全部呈多克隆性,而经CML细胞和PML-RARα多肽诱导2周后则分别在Vβ21、Vβ13、Vβ14和Vβ16中呈现克隆性增殖的T细胞。(4) 60例脐带血均全部表达TCRζ基因,相对mRNA表达量为6.7%±5.56%,而CD4和CD8T细胞的TCRζ基因相对mRNA表达量分别为6.74%±2.0%和6.88%±1.76%,�

关 键 词： 脐带血 和 细胞 亚家族 亚家族 基因 流式细胞术 基因扫描 实时荧光定量

领　　域： [医药卫生—免疫学] [医药卫生—基础医学]