导　　师： 黄雪松;陈于陇

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的:本文对大蒜果聚糖代谢酶对其分离、纯化以及其生物活性和酶学特征等予以研究。方法:(1)采用不同饱和度的硫酸铵分级沉淀1-SST,以确定其所在的硫酸铵部位。取1-SST活力最高的硫酸铵饱和度部分与底物蔗糖反应,研究其酶学特征。(2)通过改变展开剂的种类和流动相的比例,寻找合适的TLC方法快速检测大蒜果聚糖代谢酶产物低果聚糖。(3)对大蒜粗酶液通过DEAE Sepharose FF阴离子交换层析和Superdex 200凝胶过滤层析等方法予以细分,同时利用TLC方法快速检测大蒜果聚糖代谢酶。(4)通过TCA/丙酮法,改进的TCA/丙酮法,酚-甲醇/醋酸铵沉淀法,TCA/丙酮/重蒸酚法等方法对大蒜全蛋白进行了提取,利用双向电泳技术对大蒜蛋白质进行分离。结果与讨论:(1)大蒜1-SST主要存在于30%-40%硫酸铵分级沉淀部分,其最适温度为35℃,最适反应的p H为5.0,最适反应物蔗糖的质量浓度为500 mg·m L-1,离子强度越低其活力越强,反应过程中动力学米氏常数Km=104mmol·L-1,Vmax=2500μg·m L-1·h-1,大蒜1-SST随温度、p H、离子强度、底物质量浓度等变化,不仅影响大蒜贮藏过程中的果聚糖代谢,也影响大蒜加工产品,尤其是大蒜提取物中糖的种类和含量。(2)找到了合适的新的TLC方法快速检测低果聚糖,其方法为正丁醇:异丙醇:冰乙酸:水﹦35:25:20:10(展开3次),这样就为大蒜果聚糖代谢酶分离、纯化过程中,快速定性的检测大蒜果聚糖代谢酶提供了合适的方法。(3)通过对大蒜粗酶液予以细分,利用TLC方法快速检测,发现大蒜中还可能还存在6-SFT、1-FFT或6G-FFT,具体哪一种还有待验证。这进一步解释了大蒜中除了存在1-FEH、1-SST外,还可能存在其他种类的大蒜果聚糖代谢酶。(4)通过几种大蒜蛋白质提取方法比较,TCA/丙酮法/重蒸酚法更适合大蒜全蛋白的提取,这为今后进一步研究大蒜蛋白质组学,提供了方法依据。

关 键 词： 大蒜 果聚糖 果聚糖代谢酶 果聚糖 果聚糖 果糖基转移酶 双向电泳

领　　域： [农业科学—蔬菜学] [农业科学—园艺学] [生物学—植物学]