导　　师： 李正球

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 化学选择性修饰是研究蛋白质表达与功能的重要方法;近年来，研究人员发展了系列针对半胱氨酸，赖氨酸，甲硫氨酸等氨基酸残基的选择性修饰分子。将这类分子探针与活性导向蛋白谱学分析技术(activity-based protein profiling, ABPP)相结合，发现了系列高活性的氨基酸位点与新的药物作用靶标，为药物发现与疾病治疗提供了重要基础。生物体内酸性氨基酸残基包括谷氨酸和天冬氨酸，其残基数量占生物体系总氨基酸残基的比例高达12.1%，并且部分酸性氨基酸残基对维持蛋白质结构与功能起着关键的作用。然而，由于酸性氨基酸残基的亲核能力相对较弱，要在复杂的生物体内对酸性氨基酸残基实现选择性修饰仍然是一大挑战性课题。　　本论文结合课题组前期在酸性氨基酸修饰方面的研究基础，考察了各类含有羧酸作为反应物的化学反应。我们发现3-苯基-2H-氮杂环丙烯能够在温和条件下与羧酸发生分子间偶联反应。通过羧酸将氮杂环丙烯质子化，亲核加成和分子内的重排反应后生成稳定的N-乙酰基酰胺偶联产物。而其他的氨基酸残基不能使氮杂环丙烯质子化，由此我们推测氮杂环丙烯可以作为生物体内针对酸性氨基酸的选择性探针。　　为了验证这一设想，我们合成了一系列基于氮杂环丙烯的分子探针AZ-1~AZ-11，区别主要在于氮杂环丙烯的2、3位引入烷基或芳基，考察不同取代基对探针的标记效率和选择性的影响。我们首先通过核磁共振仪测试了探针在生理条件下的化学稳定性，实验结果证明探针室温下可以在水溶液中保存至少3天不降解。再利用高效液相色谱仪研究了AZ-11与各氨基酸侧链的反应活性，经核磁图谱确证，AZ-11与Boc保护的谷氨酸在PBS/四氢呋喃混合溶液中的反应产物是和我们设想一致的稳定N-乙酰基酰胺产物。然后通过高效

关 键 词： 蛋白质修饰 氮杂环丙烯 酸性氨基酸残基 活性导向蛋白谱学分析

领　　域： [医药卫生—药物化学] [医药卫生—药学]