导　　师： 陆大祥

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的： 本实验拟观察原花青素对HO引起视网膜神经节细胞RGC-5凋亡的影响，并初步探究其作用机制。在此基础上拟利用原代组织培养模型验证原花青素对视网膜神经节细胞的保护作用。 方法： 第一部分原花青素对HO诱导视网膜神经节RGC-5细胞凋亡的影响及机制初探 1、HO损伤模型的建立 (1)细胞鉴定：采用Thy1.1蛋白特异性荧光染色(免疫组化法)对培养视网膜神经节RGC-5细胞进行鉴定;(2)HO损伤浓度梯度：将HO按浓度梯度分为0、200、400、600、800μM处理组，在损伤7h后，应用MTT法检测各组细胞活力，观察HO对视网膜神经节RGC-5细胞的损伤情况。 2、OPC对HO损伤后RGC-5细胞的影响 (1)OPC安全剂量：观察不同剂量(0-240μM)原花青素对视网膜神经节RGC-5细胞的活力的影响;(2)OPC对损伤后RGC-5细胞的影响： ①M TT检测OPC对HO(0-800μM)损伤后RGC-5细胞的影响;②O PC(5、10、20、40μM)对HO(400μM)损伤后RGC-5细胞凋亡的影响： a. Hoechst33342染色检测各组视网膜神经节RGC-5细胞凋亡情况;b. Annexin-V/PI双染流式细胞术分组检测各组视网膜神经节RGC-5细胞凋亡情况。 3、OPC抗HO损伤后RGC-5细胞凋亡的机制初探 (1) Western Blot检测观察OPC(10、20、40μM)对HO(400μM)引起视网膜神经节RGC-5细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达量的影响;(2)Western Blot检测观察OPC(10、20、40μM)对HO(400μM)引起视网膜神经节RGC-5细胞凋亡蛋白Caspase-3表达量的影响。 第二部分：原花青素对原代培养视网膜神经节细胞HO损伤模型的影响 1、上丘逆行性荧光金标记法特异性标记原代培养的视网膜神经节细胞;2、HO损伤模型：将HO按浓度梯度分为0、100、200、300μM处理组，在损伤7h后，计数各组间带荧光金视网膜神经节细胞的存货率;3、原代视网膜组织离体培养，荧光视网膜神经节细胞计数(冰冻切片)观察OPC(10、20μM)对视网膜神经节细胞HO(100μM)损伤�

关 键 词： 原花青素 视网膜神经节细胞 凋亡

领　　域： [医药卫生—药理学] [医药卫生—药学]