导　　师： 苏磊

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 中暑(heat stroke)由于全身炎症反应(SIRS)作用,广泛存在着血管内皮(VEC)损伤,伴随血管渗漏、出血、组织水肿等病理改变,导致微循环障碍、休克与多器官功能障碍综合征(MODS)。血管通透性的改变与血管内皮的粘附连接(AJ)及血管内皮钙粘素(VE-Cadherin)的功能结构紧密相关。然而,中暑的血管通透性变化规律及其深入分子信号通路机制的研究仍有待开展。目的:1.研究热打击下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的通透性变化规律。2.研究p38 MAPK通路对热打击所致HUVECs通透性变化及对VE-Cadherin分布变化的影响。方法:1.热打击引起内皮细胞通透性变化及其分子机制1.1.构建体外HUVECs热打击模型,根据不同热打击温度分为对照组、39℃组、41℃组和43℃组,利用Transwell技术检测单层内皮细胞跨膜电阻值(TEER),利用荧光蛋白跨膜渗漏实验计算细胞通透系数(Pa)。TEER越低、Pa越大,细胞通透性越高;1.2.根据不同热打击时间把HUVECs分为对照组、1h组、2h组、和3h组,检测TEER,计算Pa,研究不同热打击时间对细胞通透性的影响。1.3.根据不同热打击时间把HUVECs分为对照组、0.5h组、1h组、1.5h组和2h组,利用Western Blot方法检测同一热打击温度下(43℃)HUVECs中VE-Cadherin总蛋白、膜蛋白和浆蛋白的含量与分布。2.p38 MAPK通路在热打击引起内皮细胞透通性变化中的作用2.1.构建HUVECs热打击模型,根据不同热打击时间分为对照组、0.5h组、1h组、1.5h组和2h组,Western Blot方法检测HUVECs中p38蛋白的磷酸化水平;2.2.构建HUVECs热打击模型,根据不同的处理因素分为对照组、SB组(p38抑制剂SB203580,浓度10uM)、HS组(热打击组)和SB+HS组。其中,SB组是预先在HUVECs加入SB203580并于细胞培养箱中共孵育2h,SB+HS组是在HUVECs加SB203580共孵育2h后行43℃热打击2h。检测各组TEER,计算Pa,以此表示HUVECs通透性;2.3.根据不同处理因素把HUVECs分为对照组、SB�

关 键 词： 热打击 丝裂原活化蛋白激酶 人脐静脉内皮细胞 通透性 血管内皮钙粘素

领　　域： []