导　　师： 吴晖

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 石斛属是兰科中的第二大属,广泛分布于亚洲、欧洲以及澳大利亚等地,在中国已发现78个种及两个变种,其中部分石斛已被证实具有免疫调节、抗肿瘤以及抗氧化等多种生理活性。目前,在市面上流通较广的可食用石斛属主要包括铁皮石斛及霍山石斛,因其苛刻的生殖要求与生长环境,导致其价格昂贵。兜唇石斛的适应能力较强,人工种植条件简单,对各种病虫害有较强的抵御能力,目前在云南宏德等地大量种植,可见其广阔的市场前景,然而有关兜唇石斛活性成分的研究非常少。为了丰富兜唇石斛的研究内容,提高其应用价值,本文对兜唇石斛中一种免疫活性多糖及抗氧化多肽进行综合研究。首先,使用水提醇沉法从兜唇石斛中提取的粗多糖cDAP得率为38.15±0.20%,使用DEAE Sepharose和Sephadex-G200 Fast Flow对其进行分离纯化得到一种多糖DAP,分子量为471 kDa。经鉴定,DAP主要由甘露糖和葡萄糖组成,摩尔比为2.48:1,其主链是由(1,4)糖苷键连接的β-D-葡萄甘露聚糖。通过小鼠巨噬细胞RAW264.7模型对DAP的免疫活性进行评价,发现DAP能有效提高RAW264.7巨噬细胞细胞因子的分泌水平。此外,DAP能促进巨噬细胞胞饮中性红的能力,在250μg/mL的浓度刺激下,DAP促进的胞饮率最佳。根据抗原-抗体反应原理,发现DAP主要与巨噬细胞膜上complement receptor 3和mannose receptor受体结合,通过刺激巨噬细胞内Akt/mTOR/MAPK和IKK/nuclear factor-?B两个主要免疫调节途径,提高了巨噬细胞的免疫调节能力。通过模拟DAP经唾液、胃肠液的体外消化实验,发现唾液环境对DAP无显著影响,胃肠液环境可引起DAP空间结构的改变,其中肠液环境在一定程度上可改变DAP的一级结构,导致还原糖含量的少量上升。在模拟肠道菌群对DAP的酵解作用时,发现肠道菌群能有效利用DAP产生六种对人体有益的短链脂肪酸,引起pH值的降低。同时选取三

关 键 词： 兜唇石斛 多糖 多肽 体外消化 体外酵解 细胞抗氧化 免疫调节

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