导　　师： 杨柳

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 目的:建立准确、灵敏、可靠的高效液相色谱-质谱联用（LC/MS/MS）法同时测定大鼠血浆、各组织、粪便和尿液中淫羊藿黄酮4种主要代谢物:箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ的质量浓度,考察箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ在大鼠血浆中的吸收规律、组织分布特征以及排泄情况。方法:大鼠血浆和组织匀浆测定方法的建立:采用乙酸乙酯液-液萃取法对大鼠血浆和组织样品进行预处理,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱（2.1×150 mm,5μm）;流动相:0.1%乙酸溶液（A）-乙腈（B）;洗脱方式:梯度洗脱（0-1 min:30%B,1-6min:30%B-95%B,6-8.5 min:95%B,8.5-9 min:95%B-30%B,9-12 min:30%B）,流速:0.3 mL·min-1;柱温:40℃。采用电喷雾离子源（ESI）,多反应离子监测（MRM）,在负离子模式下检测箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ。正常大鼠单次灌胃淫羊藿提取物水溶液(0.69 mg·Kg-1)后,利用已建立的LC/MS/MS法测定血浆和组织匀浆样品中箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ的质量浓度,绘制药-时曲线,计算主要药代动力学参数,考察其在大鼠体内的分布情况。大鼠粪便和尿液测定方法的建立:粪便样品采用5倍量甲醇超声提取90 mim,尿液样品采用甲醇等比稀释,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱（2.1×150 mm,5μm）;流动相:0.1%乙酸溶液（A）-乙腈（B）;洗脱方式:梯度洗脱（0-1 min:30%B,1-6 min:30%B-95%B,6-8.5 min:95%B,8.5-9 min:95%B-30%B,9-12 min:30%B）,流速:0.3 mL·min-1;柱温:40℃。采用电喷雾离子源（ESI）,多反应离子监测（MRM）,在负离子模式下进行检测。正常大鼠单次灌胃淫羊藿提取物水溶液(0.69 mg·Kg-1)后,测定粪便和尿液中箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ的质量浓度,计算主要排泄动力学参数,考察排泄特征。结果:大鼠血浆样品中,箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ在0.5200 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,日内精密度RSD≤4.8%,准确度介于102.4%-109.3%之间;日间精密度RSD≤12.8%,准确度介于93.3%-109.3%之间;提取回收率介于102.4%-109.3%之间,RSD≤1.9%;基质效应介于108.3%-112.7%之间,RSD≤3.5%;4种淫羊藿黄酮代谢物的AUC0-t分别为103.25±43.83 ng/L·h,121.97±63.52 ng/L·h,1376.99±776.33 ng/L·h,71.11±28.28 ng/L·h,Tmax分别为11.70±4.55 h,14.40±5.42 h,14.40±5.42 h,12.80±2.19 h;t1/2,α分别为9.74±4.18 h,8.19±3.12 h,8.87±3.23 h,9.28±3.00 h。大鼠组织样品中,箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ在0.5200 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,日内精密度RSD≤7.7%,准确度介于92.8%-107.6%之间;日间精密度RSD≤12.5%,准确度介于90.1%-111.6%之间,提取回收率介于66.0%-110.8%之间,RSD≤7.5%;基质效应介于91.2%-113.8%之间,RSD≤8.6%;胃和小肠的稀释因子准确度分别介于102.0%-105.7%和88.4%-102.3%之间,RSD≤4.6%和RSD≤5.4%;实验结果显示4种淫羊藿黄酮代谢物在0.25 h就能迅速地分布至全身各个组织,并且持续时间长,在24 h时仍可在各个组织中检测到4种黄酮代谢物。其中绝大多数黄酮代谢物分布于小肠和胃中,其次是肝和肺,肾中分布相对较少,其它组织中的分布情况相差无几。大鼠粪便和尿液样品中,箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ在0.5200 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,粪便中各待测物的日内精密度≤5.2%,准确度介于94.2%-108.3%之间;日间精密度RSD≤12.8%,准确度介于93.4%-109.0%之间;尿液中各待测物的日内精密度RSD≤5.1%,准确度介于94.5%-108.5%之间;日间精密度RSD≤10.9%,准确度介于93.9%-108.8%之间。大鼠灌胃淫羊藿提取物36 h后,箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ的粪便中的平均累积排泄量分别为:665240.500±296234.200 ng,622723.375±184210.063 ng,8486770.833±2490226.380 ng,1363643.833±536522.772 ng,累积排泄量与给药量比值分别为:45.500±22.383%,39.730±11.389%,47.702±13.733%,26.889±10.301%;在尿液中的平均累积排泄量分别为:76.710±82.800 ng,70.148±78.818 ng,2274.088±2962.171 ng,67.974±54.035ng,累积排泄量与给药量比值分别为:0.201±0.204‰,0.164±0.173‰,0.462±0.563‰,0.049±0.037‰。结论:本文所建立的高效液相色谱-质谱联用（LC/MS/MS）法准确、灵敏、可靠,能够满足血浆、组织、粪便和尿液样品中箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ的同时测定。根据血浆药动学参数Cmax和AUC0-t可以看出各代谢物在血浆中的含量较低,说明4种黄酮代谢物在大鼠体内吸收差;根据本课题组前期研究,淫羊藿提取物中朝藿定A、B、C及淫羊藿次苷Ⅱ在大鼠血浆中的含量也不高,说明其原形成分和代谢产物在体内的吸收均较差。t1/2和MRT说明各代谢物在大鼠体内的消除速率较慢,可能是由于肠道是4种代谢物的主要排泄途径造成的。从组织分布情况看,大鼠单次灌胃淫羊藿提取物后,箭藿苷A、箭藿苷B、2'-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ及淫羊藿次苷Ⅱ广泛分布于各个组织,胃和小肠中含量很高,而且持续时间长。肝脏和肺中各代谢物的含量也比较高,提示这两个组织可能是其发挥药效的靶向性器官;脑和睾丸中的含量虽不是很高,但说明各代谢物能够通过血脑屏障和血睾屏障,为其在神经系统和生殖系统中的作用提供一定的科学依据。从尿液和粪便的药动学参数可以看出,尿液中4种淫羊藿黄酮代谢物的含量低,而粪便中的含量较高,说明肾脏不是淫羊藿黄酮代谢物的主要排泄途径,其主要排泄途径是肠道。更多还原

关 键 词： [1034798]淫羊藿黄酮 [32001]代谢物 [864696]药代动力学 组织分布 [2861695]排泄

分 类 号： [R285.5]

领　　域： []