导　　师： 曹洋

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 目的:本课题组前期研究发现,金福安汤可以改善患者的血液流变学状态,从而对肺癌的发展和转移起到一定的抑制作用。进而通过体外实验和动物实验证实了金福安汤对于人肺腺癌细胞A549有抑制作用,并且可以对小鼠Lewis肺癌的生长和转移起到抑制作用,其机制可能与金福安汤作用于P120ctn并干预其表达有关。Kaiso是锌指蛋白超家族中的一员,是P120ctn的转录因子,而P120ctn是唯一一个可以与Kaiso结合的蛋白,对于肿瘤的转移和侵袭有重要的作用。因而我们推测,金福安汤可能是通过干预P120ctn及其转录因子Kaiso干预肺癌的转移和发展的。本研究拟通过动物实验,以顺铂作为阳性对照,观察金福安汤对于人肺腺癌A549荷瘤小鼠的作用,包括其抑瘤作用、抗转移作用和对生活质量的影响,观察P120ctn、P120ctn亚型1A、P120ctn丝氨酸288位点的磷酸化和P120ctn转录因子Kaiso的表达,进而探究金福安汤的抑瘤和抗转移的作用机制。方法:将人肺腺癌细胞株A549进行细胞培养传代后制成肿瘤细胞悬液,50只小鼠在右前腋接种A549肿瘤细胞悬液0.2ml制成A549荷瘤小鼠模型,并运用随机数字表法分为5组:金福安汤高剂量组、金福安汤中剂量组、金福安汤低剂量组、阳性对照组(顺铂组)、模型组(生理盐水组)。余未接种10只为健康对照组。固定于每日9:00-11:00给药并观察小鼠生活状态,每3日记录小鼠体质量、摄食量以及不良事件发生情况。共给药21天。实验结束后所有小鼠脱臼处理,眼科剪剥离肿瘤以及肺。称量小鼠肿瘤质量,计算抑瘤率。通过小鼠体质量、瘤体质量、摄食量探讨对比金福安汤与顺铂对小鼠抑瘤作用和生活质量的影响。运用免疫荧光、免疫组化、实时荧光定量PCR探讨金福安汤对A549荷瘤小鼠肿瘤组织P120ctn,P120ctn亚型1A和相关转录因子Kaiso以及P120ctn丝氨酸288位点的磷酸化表达的影响,从而进一步探讨金福安汤干预肺癌转移的机制。结果:1.金福安汤/顺铂对小鼠生活质量影响的实验研究显示,金福安汤各剂量组小鼠在体质量的增长以及摄食量优于阳性对照组(P<0.05)。阳性对照组瘤重小于金福安汤各剂量组(P<0.05)。阳性对照组小鼠死亡数量以及不良事件出现均多于金福安汤各剂量组且阳性对照组小鼠出现明显的消瘦和行为异常。2.间接免疫荧光实验结果发现,金福安汤各剂量组小鼠肿瘤组织的P120ctn、P120ctn亚型1A的异常表达,包括缺失、胞质异位表达和核表达较模型组均有下降,在细胞膜上出现相对完整明亮的绿色荧光,而阳性对照组中P120ctn的异常表达较模型组未有明显下降。P120ctn丝氨酸288位点的磷酸化的表达在阳性对照组及金福安汤各剂量组中较模型组均有所下降,阳性对照组中几乎不表达。模型组中,Kaiso蛋白在细胞质中呈现较弱且弥漫的绿色荧光,在金福安汤各剂量组中,细胞质中的绿色荧光表达较模型组明显减少,阳性对照组中几乎不表达。3.免疫组化实验中,P120ctn及其亚型1在金福安汤各剂量组中的异常表达较模型组下降,其中以金福安汤中剂量的异常表达数目最少,对比模型组差异具有统计学意义(P<0.05)。P120ctn(PS288)在模型组中的表达数目最多,在金福安汤各剂量组和阳性对照组中的阳性表达均出现下降,对比模型组差异具有统计意义(P<0.05)。Kaiso在模型组和金福安汤低剂量组中阳性率均为100%,然而金福安汤低剂量组评分分值小于模型组。金福安汤中剂量组Kaiso的阳性表达在中药各剂量组中最少,对比模型组评分有统计学意义(P<0.05)。阳性对照组的Kaiso阳性表达多于金福安汤中剂量组少于其他各个治疗组,对比金福安汤中剂量组差异不具有统计学意义(P>0.05)。4.实时荧光定量PCR(RT-FQ-PCR)结果表明,在金福安汤各剂量组中,P120ctn mRNA的表达和Kaiso mRNA的表达较模型组均出现下降。其中,P120ctn金福安汤中剂量组mRNA表达量最少,金福安汤低剂量组mRNA表达量相对最高,Kaiso与P120ctn的mRNA在中药组的表达情况相一致。金福安汤中剂量对比模型组差异具有统计学意义(P<0.05)。P120ctn在阳性对照组中的表达较模型组稍有下降,P>0.05,差异不具有统计学意义,然而Kaiso在阳性对照组中的表达明显下降,(P<0.05)差异具有统计学意义。结论:1.在动物实验的研究中,金福安汤有一定的控制肿瘤的作用,虽然抑瘤效果不及顺铂效果佳,然而可以改善小鼠的摄食量以及营养状态,从而提高小鼠的生活质量。2.金福安汤可能通过干预P120ctn及其亚型1的异常表达,降低P120ctn丝氨酸288位点磷酸化的表达和降低P120ctn转录因子Kaiso的胞质表达水平进而抑制肺癌的发展和转移。更多还原

关 键 词： [6726032]肺癌 P120ctn和Kaiso [1995137]生活质量 转移和侵袭 金福安汤

分 类 号： [R285.5]

领　　域： []