导　　师： 解新明

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 柱花草（Stylosanthes guianensis）作为一种优良的豆科牧草，具有茎叶产量高、营养价值丰富、富含多种氨基酸和维生素等特点，被广泛用于动物的青饲料、干草粉生产、水土保持和放牧，其除了可作为绿肥作物，还可用来土壤固氮、恢复荒地，在我国南方地区普遍应用。可是，当温度低于10℃时，柱花草的生长就会被抑制。本研究从细茎柱花草（S. guianensis var. intermedia）中获得一个较为抗寒的新品系“89-1”，利用新一代Illumina测序技术对该柱花草抗寒新品系进行转录组测序，处理条件为低温（4℃）和适温（28℃）。在转录组测序的基础上，本研究对细茎柱花草SgiM YB基因进行克隆及功能分析，主要研究结果如下：　　（1）根据转录组测序获得SgiMYB基因，通过对柱花草89-1进行RNA的提取和cDNA合成，克隆出SgiMYB基因的cDNA全长，基因全长为879 bp。在SgiMYB的蛋白结构中N末端含有一段保守的SANT结构域，属于SANT亚族。对SgiMYB氨基酸进行一个多重序列比对和进化分析，发现SgiMYB基因属于一个MYB-related转录因子亚族中的一个CCA1-like亚群的转录因子。　　（2）构建了酵母诱饵载体pGBKT7-SgiMYB和亚细胞定位载体pAN580-SgiMYB，发现SgiMYB基因有很强的转录激活性，同时SgiMYB基因蛋白定位于细胞核中。定量分析柱花草在4℃低温处理下，SgiMYB基因在根、茎和叶组织的表达模式，在4℃低温处理2h后SgiMYB基因表达量迅速上升，但随着低温处理时间增长表达量升高趋势不明显，组织表达呈现出叶>茎>根的特点。　　（3）构建过表达 SgiMYB载体 pBA002-SgiMYB，利用农杆菌介导法转化烟草，成功获得异源过表达转基因烟草株系，并挑取出3个转基因株系（OE-3、OE-4和O E-5）进行实验。在不同时间的低温处理下，转基因株系与野生型株系的表型发生变化，当低温处理24h和48 h时，转

关 键 词： 柱花草 基因 转基因技术 抗寒生理指标 测序技术

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