导　　师： 唐时幸

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 研究目的：　　CRF07_BC是我国HIV-1主要的流行基因型之一。前期研究发现，HIV-1CRF07_BC感染者的病毒载量明显低于B亚型感染者，且患者疾病进展较CRF01_AE和B亚型感染者缓慢。序列分析发现90％以上的病毒p6蛋白存在连续7个氨基酸(PIDKELY)缺失，约30％的病毒同时携带PTAPPE插入，但这些突变对病毒学特征影响及其分子机制尚不清楚。　　研究方法：　　我们采用反向遗传学方法，构建了7个氨基酸缺失(△7)、PTAPPE插入以及7个氨基酸缺失合并PTAPPE插入(P△7)的HIV-1p6突变质粒，探讨病毒的释放、成熟、感染力和复制能力等病毒学特征。　　进一步研究p6蛋白7个氨基酸缺失突变(p6△7)影响病毒表型的分子机制。　　首先，HIV-1p6蛋白位于Gag和Pol蛋白重叠区域，通过构建Gag△7和GagPol△7表达质粒，确定Gag蛋白缺失还是Pol蛋白缺失对于病毒表型影响较大。　　然后，探究p6蛋白Y36缺失对病毒释放和成熟的影响。我们分别构建p6蛋白第36位Y缺失突变（K-△Y36）、第30-35位(PIDKEL)缺失突变(K-△630-35)和第30-36位(PIDKELY)缺失突变质粒(K-△730-36)，评价突变病毒释放效率和Gag蛋白加工效率。　　由于HIV-1p6YPXnL序列与宿主蛋白Alix相互作用促进病毒释放，7个氨基酸(PIDKELY)序列与YPXnL有1个氨基酸(Y)重叠。因此，进一步确定p6突变病毒与AlixⅤ(364-716)蛋白是否具有相互作用。　　最后，研究p6△7对病毒逆转录进程的影响，通过qPCR分析病毒4种逆转录产物含量：R-U5（初始产物）、U3-U5（负链合成产物）、R-5'UTR和Gag（正链合成产物）。　　研究结果：　　病毒表型研究结果发现：(1)PTAPPE插入突变不明显影响病毒释放，感染力和复制能力，但轻度抑制病毒成熟。(2)P△7和△7病毒释放效率为野生型病毒(WT)的62％和76％，Gag蛋白加工效率为36％和52％，病毒感染力为69％和56％;病毒在MT-4

关 键 词： 艾滋病病毒 蛋白 基因突变 病毒释放 感染力 复制力 分子机制