导　　师： 沈晗;邵红伟

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东药科大学

摘　　要： 目的:探讨表达趋化因子CCL17的树突状细胞对Treg细胞增殖的影响以及可能存在的分子机制,进一步研究表达CCL17的树突状细胞作用后的Treg细胞对CD8T细胞的功能影响,为表达趋化因子CCL17的树突状细胞在肿瘤免疫治疗中的应用提供新的思路和方法。方法:一、以BABL/C雄性小鼠为模型⑴分离4-8周龄的小鼠脾淋巴细胞并在体外诱导刺激为Treg细胞,分离骨髓细胞并在体外诱导分化为BMDC细胞;通过流式细胞仪检测Treg细胞及BMDC细胞表面标记分子表达情况;荧光定量PCR检测BMDC中CCL17的表达,同时观测BMDC细胞的形态学特征。⑵利用脂质体转染法,将siRNA CCL17通过脂质体Lipofection 2000转染至BMDC细胞,通过FAM对照组检测转染效率,荧光定量PCR检测转染后的CCL17表达情况。⑶利用CFSE染色法染色Treg细胞,将Treg细胞分为三组,分别与外源重组蛋白CCL17、表达CCL17的BMDC细胞以及转染了siRNA CCL17的BMDC细胞共培养,通过流式细胞仪及细胞计数的方法检测Treg细胞的增殖情况。⑷利用western bolt法检测CCL17BMDC与Treg细胞共培养后,参与调控Treg细胞增殖的通路蛋白STAT5的表达情况。⑸体外构建一个简单的肿瘤微环境,一共选取了四个细胞,分别为CD8+T细胞、黑色素瘤细胞、CCL17BMDC细胞、Treg细胞。分别将重组蛋白CCL17、siRNA CCL17的BMDC、CCL17BMDC与Treg细胞共培养,再与CD8T细胞及黑色素瘤细胞共培养,酶标仪检测CD8T细胞对黑色素瘤细胞杀伤活力的影响。二、以人源树突状细胞为模型⑴利用pcDNA3.1(-)载体通过基因工程的手段,成功将人Foxp3基因片段构建到载体上,通过测序成功获得无突变的重组质粒pcDNA3.1-Foxp3。⑵已知Jurkat细胞是外周血CD4T淋巴细胞瘤,利用电转的方法将构建好的重组质粒pcDNA3.1-Foxp3电转至Jurkat细胞,使其表达具有Treg样细胞的相关表达,利用荧光定量PCR检测转染后细胞表面相关分子的表达。⑶分�

关 键 词： 树突状细胞 细胞免疫 肿瘤

领　　域： []