导　　师： 靳安民

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 本研究首次明确了resistin在椎间盘退变过程中起着重要的作用，从细胞水平多层次反复验证了resistin引起椎间盘退变的详细作用机制，为研发椎间盘退变新的生物学治疗提供充分的科学依据，为临床上椎间盘退变及其继发的腰腿痛患者带来治疗的曙光。　　第一部分：抵抗素(Resistin)通过调节p38MAPK信号通路促进椎间盘退变的作用及其机制研究　　目的：明确抵抗素(Resistin)对椎间盘内髓核细胞的影响，探讨抵抗素(Resistin)对细胞外基质降解酶(ADAMTS5)调节作用，并进一步探讨抵抗素(Resistin)对椎间盘基质退变的信号传导通路(p38MAPK信号传导通路)、作用靶点等详细机制，从而进一步明确抵抗素(Resistin)对椎间盘基质退变的相关研究奠定基础。　　方法：采用原代髓核细胞提取和培养方法：体外提取培养大鼠椎间盘髓核细胞，在使用不同浓度的抵抗素(Resistin)刺激大鼠髓核细胞8，24小时后检测髓核细胞活性水平的改变。使用抵抗素(Resistin)刺激髓核细胞不同时间4，8，24小时后通过蛋白印迹法(Western blotting)和实时定量逆转录多聚酶链反应(Real-time RT-PCR)检测细胞外基质降解酶的表达水平的改变。随后使用不同浓度的resistin25，50，lOOng/ml刺激髓核细胞后通过Westem blotting和RT-PCR检测细胞外基质降解酶(ADAMTS5)蛋白和mRNA水平的变化。紧接着使用resistin刺激髓核细胞5，15，45，60分钟，3小时后，采用Western blotting方法检测resistin对p38MAPK信号通路的激活调节;采用ADAMTS5野生型（wild-type）荧光素酶启动子报告基因质粒转染髓核细胞并检测resistin和resistin与p38MAPK通路抑制剂(SB203580)共同处理对ADAMTS5启动子水平的调节作用;随后采用Westem blotting和RT-PCR检查方法检测resistin和resistin与p38MAPK通路抑制剂(SB203580)应用于髓核细胞后ADAMTS5的表达情况，最后采用免疫荧光检查方法检测

关 键 词： 椎间盘退变 抵抗素 诱导作用 分子机制