导 师: 文彬
授予学位: 博士
作 者: ();
机构地区: 广州中医药大学
摘 要: 背景和目的: 大肠癌(CRC)对人类生活健康构成了极大的危险,深入了解肠癌发生发展机制及开发有效药物的形势已刻不容缓。研究发现肿瘤微环境(TME)中的肿瘤细胞与基质细胞通过其分泌到微环境中的转化生长因子-β(TGF-β)发生串扰从而促进基质细胞之间的表型转变,而且研究发现在表型转变过程中伴随有表观遗传学的改变,而组蛋白修饰作为表观遗传学中的重要成分因结构特性因而可通过各种化学基团修饰对周围环境进行即时快速响应,因此组蛋白修饰可能参与了细胞表型转变相关机制。中药单体吴茱萸碱和小檗碱对肿瘤细胞均具有较强的抗肿瘤活性,然而对其具体的抗癌机制尚不明确,因此,本研究旨在通过TGF-β1体外诱导结肠上皮细胞系NCM460构建表型转变模型探讨组蛋白修饰变化机制以及吴茱萸碱和小檗碱的干预效应。 方法: 将含有10ng/mlTGF-β1培养基培养永生化结肠上皮细胞系NCM460至15天(d)后采用细胞免疫荧光进行细胞表型标志物E-cadherin、ZO-1和vimentin的免疫荧光检测,同时采用免疫印迹(western blotting)对此三种表型标志物及表型相关转录因子Snail和Slug的蛋白表达进行了测定。为了探索细胞表型转变中染色体不稳定及组蛋白修饰模式的变化,分别采用分选式流式细胞仪(FACS)和western blotting检测TGF-β1诱导表型转变后的细胞中非整倍体细胞百分比情况和五种组蛋白修饰标记物(H3K4me2、H3K4me3、H3K9me2、H3K9ac、H3K27me3)蛋白表达水平。为了探讨左金丸主要活性成分吴茱萸碱和小檗碱对TGF-β1的生物学效应的干预作用,将TGF-β1诱导表型转变后的细胞进行不同浓度吴茱萸碱(5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml)和小檗碱(50μg/ml、75μg/ml和100μg/ml)处理后72h后,分别按照上述方法检测表型标志物及Snail、Slug表达,非整倍体细胞百分比变化以及异