导　　师： 王庆恒

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 广东海洋大学

摘　　要： 光裸星虫(Sipunculusnudus)具有很高的经济价值和生态价值，现有的光裸星虫繁殖生物学研究薄弱，制约了人工繁育技术的提高。光裸星虫生殖细胞在体腔液中游离发育，不同发育时期的卵母细胞各自独立。本研究利用超微结构观察结合转录组测序认识光裸星虫卵母细胞发育的分子生物学过程，筛选关键基因并进行克隆和表达验证。研究结果可为光裸星虫生殖调控及人工育苗提供数据支撑和理论指导，也可为无脊椎动物卵子发生的分子机制研究积累基础资料。具体研究结果如下：　　1、利用光镜和电子显微镜观察了光裸星虫卵母细胞、胚胎及幼体发育过程，结果表明：(1)可依据卵母细胞超微结构及存在场所的变化将发育过程划分为6个阶段，其中Egg1-Egg4在体腔液中发育，为卵母细胞生长阶段，主要进行各种物质的合成和积累;Egg5在肾管中发育，生发泡发生破裂(GVBD);Egg6为排放到水体中的卵母细胞。(2)确定了Egg1-Egg4与卵径之间存在对应关系，可利用细胞筛进行分级分离。(3)胚胎及幼体发育经历卵裂、囊胚、原肠胚、担轮幼虫、海球幼体、匍匐幼体等主要阶段，从卵裂到担轮幼虫均在卵黄膜内发育;海球幼体出膜即可快速游动，以浮游植物为食;匍匐幼体在底质表面爬行，吞食砂砾，以其中的底栖硅藻为食。　　2、构建了卵母细胞Egg1-Egg6的转录组文库，共得到82,485个Unigene，均获得功能注释，检出22,691个CDS、10,132个SSR，并预测出3,926个编码转录因子的Unigene。差异表达基因分析显示Egg2VSEgg3以及Egg4VSEgg5是最重要的两个发育时期。其中，KEGG和GO富集分析发现，Egg2VSEgg3涉及基因复制、转录及翻译等过程相关通路被显著富集，且有关基因明显上调，表明Egg3发生了明显的DNA复制和蛋白合成过程。Egg4VSEgg5涉及膜变化的通路显著富集，与Egg5发生GVBD相吻�

关 键 词： 光裸星虫 卵母细胞 转录组分析 内参筛选 基因克隆

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