导　　师： 黄韧;吴科锋;李文德

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东医科大学

摘　　要： 目的：　　1.提取与分离黄皮果果肉和果核挥发油，并分析其主要成分;2.考察黄皮果果核和果肉挥发油对体外蘑菇酪氨酸酶活性的影响;3.探究黄皮果果核和果肉挥发油抑制B16-F10细胞黑素合成作用及其机制;4.研究黄皮果果核和果肉挥发油对诱导B16-F10细胞凋亡的影响。　　方法：　　1.取干燥黄皮果实，分离肉、核，粉碎，水蒸气蒸馏法分别从果肉和果核中提取挥发油，测定提取率;将肉挥发油和核挥发油置于-20℃冰柜12 h，分取上清液;GC-MS分析其并鉴定主要化学成分。　　2.以L-DOPA为底物，通过多巴氧化法，测定不同浓度的黄皮果果肉挥发油（Essential oil of fruit flesh，EOF）和果核挥发油（Essential oil of fruit kernel， EOK）对蘑菇酪氨酸酶活性的影响，并以DL-α-生育酚和抗坏血酸钠作为阳性效应物进行对照。　　3.用不同浓度的 EOF和 EOK加入含或不含α-黑素细胞刺激素（Alpha-melanocyte stimulating hormone,α-MSH）处理B16-F10细胞12 h，利用多巴氧化法比较其对B16-F10细胞酪氨酸酶活性的作用;采用同样的方法处理细胞， NaOH法测定胞内黑色素含量、用蛋白免疫印迹法检测B16-F10细胞酪氨酸酶（Tyrosinase, TYR）、酪氨酸酶相关蛋白-1（Tyrosinase associated protein-1, TRP-1）、酪氨酸酶相关蛋白-2（Tyrosinase associated protein-2, TRP-2）及小眼畸形相关转录因子（Microphthalmia transcription factor, MiTF）的表达水平。　　4. EOF和EOK诱导B16-F10细胞凋亡：用不浓度的EOF和EOK对B16-F10细胞分别处理处理24 h、48 h、72 h，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞存活率;罗丹明123（Rhodamine123, Rh123）染色，采用荧光显微镜检测线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential, MMP）的变化;Annexin V-FITC染色，利用荧光显微镜检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测核转录因子-кB(Nuclear factor-кB, NF-кB P65）及其磷酸化的

关 键 词： 黄皮果 挥发油 抗黑素 信号通路

领　　域： [] []