导　　师： 王正

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 本文主要从以下几个部分展开论述：　　第一部分 NCI-H460源性肺癌干细胞样细胞的扩增与鉴定　　目的：　　从体外培养NCI-H460细胞系得到第2代球细胞，与NCI-H460细胞对照，鉴别NCI-H460细胞系第2代球细胞是否具有肺癌干细胞样细胞(lung cancer stem-like cells,LCSLC)性质。　　方法：　　干细胞条件培养基超低粘附培养板悬浮培养得到NCI-H460细胞系第2代球细胞。肿瘤球形成法对比测定NCI-H460细胞和NCI-H460细胞系第2代球细胞自我更新;创口愈合法和Transwell小室细胞侵袭试验对比检测细胞迁移和侵袭能力;藻红蛋白(PE)标记流式细胞术和蛋白质印迹对比分析肿瘤干细胞标志物(CD133、CD44和ALDH1)和多能性转录因子(Bmi1、Nanog和OCT4)以及上皮间充质转化(epithelial-mesenchmal transition,EMT)标志物(E-cadherin和N-cadherin)与EMT相关调节因子(Twist1和Snail1)蛋白表达水平;细胞有限稀释裸鼠皮下移植瘤实验对比检查体内致瘤性。　　结果：　　1.干细胞条件培养基超低粘附培养板悬浮培养获得的NCI-H460源性球细胞能连续传代10代以上，以第2代球细胞第3次球培养得到的肿瘤球形成率最高(P＜0.05)。极限稀释法发现单个NCI-H460源性第2代球细胞在第6天能形成典型肿瘤球。　　2.与NCI-H460细胞相比，NCI-H460细胞系第2代球细胞体外细胞迁移和侵袭能力更强。　　3.与NCI-H460细胞相比，NCI-H460细胞系第2代球细胞肿瘤干细胞标志物(CD133、CD44和ALDH1)和多能性转录因子(Bmi1、Nanog和OCT4)蛋白表达水平更高(P＜0.05)。　　4.与NCI-H460细胞相比，NCI-H460细胞系第2代球细胞N-cadherin、Twist1和Snail1上调(P＜0.05)，同时，E-cadherin蛋白表达下调(P＜0.05)。　　5.与NCI-H460细胞相比，NCI-H460细胞系第2代球细胞裸鼠体内致瘤能力更强(P＜0.05)。　　小结：　　NCI-H460细胞系第2代球细胞具有LCSLC性质。　　第二部分 MnSOD/FoxM1高表�

关 键 词： 肺癌 金雀异黄素 锰超氧化物歧化酶 叉头盒转录因子 基因调控 肿瘤干细胞样细胞 细胞表型

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