导　　师： 屈军乐;林丹樱

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 深圳大学

摘　　要： 荧光显微成像技术可通过探测荧光信号的强度、偏振、光谱、寿命等信息来获取被标记物的结构和功能信息。由于荧光分子的荧光寿命对激发态分子与周围环境的相互作用和能量转移非常敏感,且通常不受探针浓度、激发光强度、光漂白等因素的影响,因此对样品中荧光分子的荧光寿命进行探测和成像的荧光寿命显微成像(Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy,FLIM)技术可用于定量测量荧光探针所处微环境中的许多生物物理和生物化学参量,如各种离子浓度、pH值、氧含量、溶液疏水性及猝灭剂分布等。故FLIM技术在生物学和微生物学研究中有着广泛的应用。时间相关单光子计数(Time-Correlated Single Photon Counting,TCSPC)技术是目前FLIM中最常用的荧光寿命探测方法。TCSPC-FLIM技术采用脉冲激光激发样品,探测并记录样品每次被激发后产生的荧光光子到达探测器的时间,通过多次重复累积后得到每个像素荧光光子数随到达时间的分布,从而利用荧光强度衰减曲线拟合计算样品荧光寿命及其分布。这种方法具有信噪比高、时间分辨率高、灵敏度高且动态范围广等特点,因此成为应用最广泛的FLIM技术。然而,传统的TCSPC-FLIM通常采用振镜作为扫描模块,由于振镜在运动过程中存在机械惯性,且扫描方式不够灵活,一定程度上制约了成像速度,使TCSPC-FLIM尚不能很好地实现对活细胞内的一些快速变化过程进行实时记录,更无法实现对细胞内运动粒子的追踪与动态寿命测量。实际上,当研究的对象是运动粒子时,激光扫描的范围应当尽量小且扫描位置需要跟随粒子的运动而变化,才能实现对该粒子的追踪和动态寿命探测,这就需要一种更加灵活且稳定的扫描方法。为此,本论文采用基于声光偏转器(Acousto-Optic Deflector,AOD)代替振镜作为扫描模块的AOD-FLIM技术,并在此基础上研究运动粒子荧�

关 键 词： 荧光寿命 时间相关单光子计数 声光扫描 粒子追踪 反馈控制

领　　域： []