导　　师： 徐新云

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 深圳大学

摘　　要： 塑化剂是一种高分子材料,它广泛运用在工业上,也叫增塑剂或可塑剂。塑化剂品种繁多,包括邻苯二甲酸酯类(phthalate acid esters,PAEs),我国常用PAEs的品种有很多。其中邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)危害最大。总的来说,生殖毒性是DEHP目前发现的最明显作用。类固醇合成急性调节蛋白(Steroidogenio acute regulatory protein,StAR)负责编码StAR蛋白前体的产生,在将胆固醇运送进线粒体的过程中,StAR蛋白前体裂解掉其线粒体靶向的部分片断,从而成为成熟的StAR蛋白,成熟的StAR蛋白最终将胆固醇运送至定位于线粒体内膜上的P450scc酶,在这一酶的作用下,胆固醇完成到孕酮的转换。为了探讨StAR基因表达改变及其对DEHP毒性影响的研究,我们针对DEHP进行了细胞实验,我们选用了人的乳腺癌MCF-7细胞进行实验。方法:1.DEHP染毒浓度为0-0.80mmol/L,将MCF-7细胞染毒24h后,采用荧光定量PCR检测StAR基因表达水平和Western blot检测StAR蛋白表达水平的改变。观察DEHP染毒的剂量-效应关系和时间-效应关系。2.利用慢病毒构建了StAR基因高表达细胞株和StAR基因沉默细胞株,再用荧光定量PCR和Western blot鉴定。3.先用不同剂量DEHP染毒正常MCF-7细胞、StAR基因高表达细胞和StAR基因沉默细胞后,再用荧光定量PCR和Western Blot检测相关基因的基因表达水平和蛋白表达水平,比较StAR基因高表达细胞和StAR基因沉默细胞与正常MCF-7细胞,从而研究DEHP毒性对StAR基因的影响。结果:1.DEHP染毒细胞24h和48h后,荧光定量PCR检测到StAR基因表达水平明显改变,且存在DEHP染毒的剂量-效应关系,用单一剂量DEHP 0.80 mmol/L染毒细胞3-48h,StAR基因表达水平,存在时间-效应关系;DEHP 0.10-0.80mmol/L染毒24h,Western Blot检测StAR蛋白表达水平的改变。结果表明,DEHP染毒24h,0.10-0.80mmol/L剂量组StAR蛋白表达水平都显著高于对照组50%-130%,差异均

关 键 词： 邻苯二甲酸 乙基己基 酯 生殖毒性 类固醇激素快速调节蛋白 基因沉默 基因高表达

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