导　　师： 谢辉

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 香蕉穿孔线虫[Radopholus similis（Cobb,1893）Thorne,1949]是一种内寄生植物病原线虫，严重危害多种经济作物以及观赏植物。化学防治是如今对香蕉穿孔线虫最常用的防治方法，但是化学杀线剂的过量使用严重污染环境和危害人类健康，因此以生物技术为策略、以线虫寄生致病基因为靶标的可持续防治该线虫的新方法已成为关注的热点。在靶标基因功能分析研究中，需要根据试验因素选择理想的内参基因进行校正和标准化，保证定量分析的准确性。但是迄今尚未有香蕉穿孔线虫内参基因的研究报道。乙酰辅酶A转运蛋白（Acetyl-coenzyme A transporter,ACATN）是内质网中的多重跨膜蛋白，参与神经节苷脂中唾液酸的O-乙酰化过程。研究香蕉穿孔线虫ACATN有助于获得更多潜在的靶标基因。但是目前尚未有植物寄生线虫ACATN基因（acatn）的报道。　　本研究利用香蕉穿孔线虫转录组数据库和qPCR技术筛选香蕉穿孔线虫的理想内参基因，并从该数据库中筛选克隆了香蕉穿孔线虫acatn，利用筛选出的内参基因对该acatn进行定量分析，获得的主要研究结果如下：　　1、利用生物信息学的方法在香蕉穿孔线虫转录组数据库中挖掘6个候选内参基因，包括4个传统的内参基因（Act1、eIF5A2、TUB、UBC）和2个新的候选内参基因（CBR、β-PP1），并在NCBI上选择了1个传统的内参基因18S rRNA。利用实时荧光定量PCR技术对这7个候选内参基因在香蕉穿孔线虫6个种群和其中的GJ种群不同虫态（雌虫、雄虫、幼虫、卵）的表达进行检测，通过BestKeeper、geNorm、NormFinder三种方法评估候选内参基因的表达稳定性，确定eIF5A2是香蕉穿孔线虫不同种群基因功能研究中的最适合的内参基因，CBR和eIF5A2是香蕉穿孔线虫某一种群不同虫态基因功能研究中的最适合内参基因，而eIF5A2是研究香蕉穿孔线虫实验

关 键 词： 香蕉穿孔线虫 乙酰辅酶 转运蛋白 内参基因 技术 分子克隆

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