导　　师： 周丽君

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： CD147(cluster of differentiation147)是一个跨膜糖蛋白，高表达于多种肿瘤细胞，多项研究证实其参与多种疾病的发生发展，我们实验室前期研究也发现敲低CD147的表达可显著增强曲妥珠单抗对HER2阳性乳腺癌敏感细胞的抑制作用，提示CD147是一个有价值的治疗肿瘤及自身免疫性疾病的靶点。目前，已有针对CD147的鼠单抗用于肝癌的靶向治疗。人源抗体在体内治疗应用中比鼠单抗更具优越性，尚未见相关报道。　　目的：　　运用实验室构建的噬菌体抗体库筛选平台筛选特异性人源抗CD147单链抗体(scFv)，利用同源重组技术将scFv转换为人源抗CD147IgG1抗体，并鉴定其生物特性，为后续评价其生物功能奠定基础。　　方法：　　通过酸洗脱法从噬菌体抗体库筛选抗CD147-scFv，用常规ELISA、DNA测序、细胞ELISA和竞争抑制实验鉴定其特异性;用硫氰酸铵洗脱法对其相对亲和力进行初步测定;以scFv为模板扩增scFv轻重链可变区，通过同源重组技术构建全人源抗CD147IgG1真核表达载体并在293F真核细胞获得表达;用亲和层析法分离纯化抗体，SDS-PAGE鉴定纯化效果;用ELISA和Western Blot验证抗体的特异性;用CCK-8法初步测定抗体对表达CD147乳腺癌细胞增殖能力的影响。　　结果：　　1、通过四轮富集性筛选，抗体获得750倍富集;经常规ELISA、DNA序列分析、细胞ELISA和竞争抑制实验鉴定，获得了3个具有不同基因型序列的特异性克隆（13号、15号和168号），其轻重链的可变区分属VλⅠ/VHⅠ、VκⅢ/VHⅢ、和VλⅢ/VHⅢ亚群;成功进行可溶性表达后证实三者均可与CD147特异结合。用硫氰酸铵洗脱法测出3个抗CD147-scFvs的相对亲和指数(RAI)分别为0.2mol/L、0.35mol/L和0.6mol/L，其中，168号的相对亲和力优于13号和15号。　　2、PCR扩增3种抗CD147-scFv的VH、Vκ/λ序列，琼脂糖凝胶电泳鉴定条带大小正确;采用�

关 键 词： 肿瘤细胞 人源抗体 跨膜糖蛋白 同源重组 生物功能

领　　域： []