导　　师： 千忠吉

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东海洋大学

摘　　要： 过量饮酒会引起广泛的肝脏疾病，如脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌。特别是酒精性肝病(alcoholiclivedisease,ALD)，已引起广泛关注。本文以来源于海马的两种多肽为实验原料，考察了两种海马多肽的活性，研究了SHP-1(VSIADSKA,Val-Ser-Ile-Ala-Asp-Ser-Lys-Ala)和SHP-2(ENANGP,Glu-Asn-Ala-Asn-Gly-Pro)对人肝癌细胞(HepG2)酒精性损伤的保护作用及其机制，为海马多肽在ALD的预防和治疗中提供了理论基础。　　主要研究内容及结果如下：　　1、采用MTT实验测定细胞活力。实验结果表明，酒精的最佳作用浓度为0.75M;在10-100μM浓度范围内，两种多肽对细胞均无毒害作用;与酒精损伤组（对照组）相比，在10-100μM时，细胞相对活力明显增强，且呈浓度依赖性。这说明两种海马多肽对酒精诱导的HepG2细胞损伤均具有保护作用。　　2、采用DCFH-DA法检测细胞内ROS的含量。实验结果表明，与对照组相比，两种海马多肽都减少了细胞内ROS的含量，即海马多肽可有效抑制ROS的生成。　　3、采用SOD、GSH和GGT检测试剂盒检测细胞内SOD、GSH和GGT的含量，并利用westernblot检测SOD、GSH和GGT的表达情况。实验结果表明，与对照组相比，海马多肽能够有效恢复细胞内SOD和GSH活力，使GGT含量减少;使细胞内SOD和GSH表达明显增加，而GGT表达减少。　　4、采用westernblot检测与细胞凋亡相关的蛋白表达情况。实验结果表明，与对照组相比，样品组的bax、c-caspase-8/9-3的表达均明显降低;而bcl-2水平上调，即海马多肽可抑制HepG2细胞凋亡。　　5、采用westernblot检测两种海马多肽对Akt和NF-κB信号通路的影响。实验结果表明，与对照组相比，p-Akt、p-IkB-α和p-p65的表达均明显下调，即海马多肽对Akt和NF-κB信号通路有抑制作用。　　6、采用免疫荧光法检测p65蛋白入核情况。实验结果表明，与对照组相比，两种�

关 键 词： 肝脏疾病 海马多肽 细胞 氧化应激 细胞凋亡 损伤