导　　师： 顾江

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 汕头大学

摘　　要： 背景和目的　　免疫球蛋白G（IgG）是体液免疫的重要组成部分。IgG4，是人体内含量最少的IgG亚型，已有报道IgG4在肿瘤病人体内会升高并影响病人的免疫功能。巨噬细胞是一种常见的免疫细胞，能够介导抗体依赖细胞吞噬作用（ADCP）。巨噬细胞主要分为两种亚型，M1和M2，两者在肿瘤免疫中发挥着相反的作用。近年来上市的单克隆抗体据报道可通过介导ADCP对特定的肿瘤细胞进行杀伤。那么在肿瘤微环境中增加的IgG4对巨噬细胞介导的对肿瘤细胞的ADCP是否存在干扰，我们为此进行了相关的探讨。　　材料方法　　材料：　　食管癌肿瘤组织来自汕头大学附属肿瘤医院及粤东病理会诊中心，正常人血液标本来自汕头大学医学院志愿者。　　所用细胞系为B淋巴细胞肿瘤细胞系Raji。　　方法：　　免疫组化染色（IHC）：观察食管癌组织CD68和CD163的表达。　　蛋白提取：层析柱分离IVIG或者正常人血浆中的IgG1和IgG4。　　磁珠分选：分选CD14+单核细胞。　　蛋白质免疫印迹：验证提取的IgG1和IgG4的纯度。　　流式细胞术：细胞Marker的表达，验证M1和M2巨噬细胞分化，检测ADCP中巨噬细胞对Raji细胞的吞噬作用。　　吉姆萨染色：将培养的细胞进行固定染色，显微镜下统计细胞吞噬率。　　结果　　共收集食管癌病人肿瘤相关组织40例。IHC发现癌组织有同时CD68CD163阳性的细胞。　　蛋白质免疫印迹验证了提纯的蛋白分别为IgG1和IgG4，并且没有交叉污染。　　流式细胞术验证了M1巨噬细胞的IL-1β、IL-12、TNF-α表达比M2高，M2的CD163表达比M1高。　　ADCP模型构建及相关实验，通过吉姆萨染色，统计吞噬细胞数量，结果M1和M2型巨噬细胞在利妥昔单抗介导下，都可以吞噬Raji细胞。利妥昔单抗浓度梯度实验中，在单抗浓度在1-10μg/mL，巨噬细胞对Raji细胞的吞噬

关 键 词： 食管癌 巨噬细胞 单克隆抗体 免疫球蛋白 抗体依赖细胞吞噬

领　　域： []