导　　师： 陈建南

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 背景:病毒性肝炎作为临床上一种常见病症,其危害极其严重。在研究病毒性肝炎常用的模型—LPS/D-Galn诱导的小鼠急性肝炎模型中,NF-кB信号途径参与LPS/TLR4下游级联反应,且其作为调控炎症因子表达的关键途径,核转录相关因子Nrf2是调节抗氧化应激反应的重要转录因子,TLR4/NF-кB和Nrf2信号通路共同参与了LPS/D-Galn诱导的小鼠急性肝炎的调控,对影响肝损伤的进程具有重要作用。中药蒲葵子(Livistona chinensis R.Br.)属于棕榈科蒲葵属植物,在民间广泛使用,具有治疗肝炎和癌症的作用,本课题组前期研究发现蒲葵子乙酸乙酯部位可以明显改善ConA造成的小鼠急性肝损伤,其机制可能与抗氧化损伤有关;UPLC-MS法分析蒲葵子乙酸乙酯部位,发现其主要含有黄酮类化学成分,因此对蒲葵子总黄酮进行研究,对明确蒲葵子保肝的药效物质和蒲葵子的进一步开发利用具有重要作用。目的:为考察蒲葵子总黄酮(The total flavone of Livistona chinensis fruits,FLCF)药理作用及其机制,本实验采用LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型和LPS/D-Galn致小鼠急性肝损伤模型,考察FLCF的药理作用并探讨其可能的作用机制。方法:1.先后利用大孔树脂、聚酰胺纯化FLCF,并利用紫外可见分光光度计检测其含量,利用HPLC鉴定FLCF中黄酮的组成成分。2.在体外实验中,利用MTT法检测RAW264.7细胞存活率,评价FLCF的毒性;ELISA试剂盒测定细胞上清液TNF-α、IL-6和NO;试剂盒检测细胞ROS的表达情况;免疫荧光法检测Nrf2的表达情况;Western Blot检测FLCF对LPS诱导TLR4/NF-кB和Nrf2/HO-1通路的影响,从细胞、分子以及信号转导等层面对FLCF体外作用机制进行研究。3.在体内实验中分两部分实验,第一部分将70只Babl/c小鼠随机分为7组:正常对照组(NC)、LPS/D-Galn组(L/D)、FLCF(100 mg/kg)+L/D组(L/D+L-FLCF)、FLCF(200mg/kg)+L/D组(L/D+M-FLCF)、FLCF(400mg/kg)+L/D组(L/D+H-FLCF)、水飞蓟素(100mg/kg)+L/D组(L/D+SYM)、FLCF(400 mg/kg)(H-FLCF)组,每组10只。FLCF组灌胃给予FLCF(400mg/kg),FLCF+L/D组分别灌胃不同剂量的FLCF预处理7天,正常对照组和L/D组仅给予0.3%的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)预处。在第七天,正常给药1h后,正常对照组和H-FLCF组腹腔注射生理盐水,其余5组分别腹腔注射D-Galn(700 mg/kg)/LPS(1μg/kg),建立急性肝损伤小鼠模型。观察造模后24h内各组小鼠的生存情况,绘制小鼠生存曲线图。第二部分将70只Babl/c小鼠随机分为7组(同上),每组10只。FLCF预处理及造模同上,于造模6h后处死全部存活的小鼠,取血清标本,检测ALT、AST、NO水平;记录肝脾脏的重量,观察肝脏的大体形态,进行HE染色,分析肝组织病理程度;检测肝组织中GSH、SOD、MDA、TNF-α、IL-6水平;免疫组化法检测TLR4和CD68的表达情况;Western Blot技术检测肝组织TLR4/NF-кB和Nrf2/HO-1信号通路和Bcl-2/Bax蛋白的表达。结果:1.FLCF中黄酮的含量为71.04%,主要由原儿茶酸、原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、荭草苷、异荭草苷、牡荆素、异牡荆素组成。2.体外实验结果显示,FLCF显著下调LPS诱导的RAW264.7细胞炎性相关因子TNF-α、L-6以及NO的分泌。且FLCF下调LPS诱导的TLR4/NF-кB信号通路,同时上调Nrf2蛋白的表达与核转位,增强下游抗氧化酶HO-1的表达,显著下调ROS的释放,进而发挥抗炎和抗氧化的作用。3.体内实验结果显示,FLCF显著提高小鼠急性肝损伤的生存率,同时显著改善LPS/D-Galn诱导的小鼠肝组织病理变化,降低小鼠血清中ALT、AST的水平,降低TNF-α、IL-6、NO炎性因子的水平,提高小鼠肝组织中抗氧化指标SOD、GSH的水平,降低MDA水平。此外,FLCF也显著下调TLR4/NF-кB信号通路,并且上调Nrf2/HO-1通路和Bcl-2/Bax蛋白的表达。结论:FLCF具有抗炎与抗氧化作用,可能通过调节TLR4/NF-кB、Nrf2/HO-1通路和Bcl-2/Bax蛋白,改善LPS/D-Galn诱导的小鼠急性肝损伤。FLCF有可能作为一种新型的药物来治疗急性肝炎疾病。更多还原

关 键 词： [2979738]蒲葵子 [3608486]总黄酮 [5716697]急性肝损伤 LPS/D-Galn 抗炎

分 类 号： [R285.5]

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