导　　师： 唐兆新

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 铜是在动物所有器官和细胞中发现的一种重要的微量元素，并发挥着重要的生物学功能。铜过载会引起肝细胞毒性，原因可能是其氧化还原性质以及参与Haber-We iss反应而产生大量的活性氧（ROS）。ROS可引起核酸和蛋白质变性、多糖降解以及脂质过氧化、对细胞造成一系列的损伤。有研究表明RO S可通过引起细胞内的DN A、脂质和蛋白质等成分氧化损伤或直接作为信号分子诱导细胞自噬。　　为研究抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸（NAC）对高铜诱导鸡肝细胞氧化应激和自噬的影响，本试验以体外培养的鸡胚原代肝细胞为模型，应用含不同浓度铜离子（10μM、50μM、100μM）和NAC（1 mM）的细胞培养液孵育肝细胞，并于不同时间点收集细胞，利用CCK-8测定细胞活性;然后将细胞分为对照组、高铜组（100μM Cu2+）、高铜+NAC组(100μM Cu2++1 mM NAC)、NAC组（1 mM NAC），孵育24 h后，测定其培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、天门冬氨酸氨基转移酶（AS T）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活性以及培养细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（C AT）、还原性谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量与活性，流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）含量，利用荧光定量PC R技术检测细胞中自噬相关基因Beclin-1、ATG-5、LC3-I、LC3-II的mRNA表达情况，结果表明：　　（1）不同浓度的铜离子和NAC孵育肝细胞时，低铜组（10μM Cu2+）和1 mM NAC组细胞的活性曲线与对照组无显著差异(P＞0.05)，而中铜组（50μM Cu2+）和高铜组（100μM C u2+）的细胞在孵育24 h后增殖显著受到抑制（P＜0.05）。高铜+NAC组的细胞在孵育24 h之内生长有下降趋势，但是24 h后其增殖抑制显著降低。　　（2）与对照组相比，高铜组细胞上清液中的LDH、AST、ALT含量都显著升高（P＜0.05），而高铜+NAC组与高铜组相比，这三种酶的活�

关 键 词： 鸡肝细胞 乙酰半胱氨酸 肝细胞毒性 氧化损伤 细胞自噬 高铜诱导

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