导　　师： 陆晓和

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的：树突状细胞对免疫的调控与其成熟度密切相关。一般情况下，成熟树突状细胞促进免疫排斥，而未成熟树突状细胞诱导免疫耐受。通过干预树突状细胞的成熟来诱导免疫耐受，对角膜移植免疫具有重要意义。本课题组前期研究发现，在免疫排斥反应中，TLR2/MyD88/NF-κB(p65)通路促进树突状细胞成熟，进而促进T细胞增殖以及炎症因子的释放，而抑制该通路能显著提高大鼠角膜移植免疫耐受。然而NF-κB(p65)通路促进树突状细胞成熟的上游机制仍不清楚，需进一步探究。移植免疫过程中，T淋巴细胞的活化需要三个信号，值得关注的是，最近有文献提出了第四信号，即细胞外三磷酸腺苷(ATP)通过启动其受体P2X7R，成为自分泌刺激物。目前尚无关于树突状细胞中P2X7R与NF-KB通路之间关系的研究，因此本研究旨在找出P2X7R和NF-κB(p65)通路在树突状细胞成熟中的关联和作用机制。　　方法：收集诱导小鼠骨锈源性树突状细胞，分为未成熟树突状细胞组(6d组)、成熟树突状细胞组（8d组）、增强成熟树突状细胞组（脂多糖LPS组）、P2X7R激动剂BzATP刺激组(Bz组)、P2X7R抑制剂OxATP刺激组（Ox组）。采用逆转录定量PCR(RT-qPCR)检测P2X7R及NF-κB(p65)的mRNA相对表达量，蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测P2X7R及NF-κB(p65)的蛋白表达量，酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清炎症细胞因子IFN-γ和IL-12的浓度，免疫共沉淀实验检测P2X7R及NF-κB(p65)蛋白间的相互作用，ATP试验检测细胞内ATP浓度。　　结果：本研究结果显示，按照6d组、8d组和LPS组的顺序，树突状细胞经历了一个逐渐成熟的形态学变化，树突状细胞释放炎性细胞因子IFN-γ和IL-12也逐渐增多，反映了树突状细胞的成熟过程。随着树突状细胞的成熟，P2X7R及NF-KB(p65)的RNA及蛋白表达均上升，细胞内ATP水平升高。用P2X7R激动剂(BzATP)�

关 键 词： 髓源性树突状细胞 成熟机制 细胞外三磷酸腺苷受体 核转录因子

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