导　　师： 师玲玲

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的:建立人多能干细胞来源的体外神经诱导发育模型,阐述该模型神经生物学发育特征。方法:1)利用双抑制因子诱导方法构建神经诱导发育模型,采用免疫荧光染色、电生理、PCR等方法对神经诱导发育模型中神经元结构与功能形成进行动态监测;2)同时采用免疫荧光染色对神经元种类进行鉴定,运用neurolucida软件构建神经元形态,动态监测不同种类神经元突起长度以及树突的复杂程度发育;3)采用ImageJ统计在PDL+laminin;PDL+matrigel;matrigel三种包被条件下神经元的分化效率,以及不同包被条件下神经元终末分化的种类比例。结果:1)本研究所建立的神经诱导发育模型能终末分化成GABA能、多巴胺能、谷氨酸能神经元,终末发育神经元具有成熟神经元的形态与功能特征;2)在发育动态过程中提取样本转录组测序发现WNT基因家族中wnt2B和wnt7A在神经发育至D0-D7时表达上调,在D7-D28表达下调,然而wnt5A在D0-D7表达下调,在D7-D28表达上调;3)本研究所构建体外神经发育模型中谷氨酸能神经元约为10.7%,多巴胺能神经元约为17.3%,GABA能神经元约为54.9%;其中GABA能神经元、谷氨酸能神经元的突起发育从3周开始达到高峰期,多巴胺能神经元的突起发育贯穿于整个神经发育过程;对于树突复杂度发育,GABA能神经元的发育集中在100μm以内,谷氨酸能神经元和多巴胺能神经元则集中于150μm以内。4)PDL+laminin包被条件与PDL+matrigel、matrigel包被条件相比较,PDL+laminin包被条件能有效提高神经前体细胞分化成神经元的效率;而在这三种包被条件对神经元终末分化种类形成没有影响。结论:1)本研究成功建立人来源多能干细胞神经诱导模型;2)WNT基因家族中相关基因在发育过程中呈现时序差异表达,可能是调控神经分化、发育的潜在因素之一;3)PDL+laminin包被条件可以提高本模型中神经元终末分化效率。

关 键 词： 诱导多能干细胞 神经发育 功能神经元 包被 基质胶

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