导　　师： 杜宝新

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 目的:肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一种罕见的神经系统疾病,表现为肌无力、肌萎缩,伴构音障碍、吞咽困难等,最终呼吸衰竭,目前缺乏特效治疗方法。本研究拟采用hSOD1—G93A转基因小鼠,给予不同浓度健脾益肺方灌胃处理,并通过评估其体重变化、运动功能、生存期等指标观察健脾益肺方的疗效;应用组织免疫荧光,检测腰段脊髓前角神经元核蛋白(Neuronal Nuclei,NeuN)、小胶质细胞特异性标志物整合素α M(CD11b)及核转录因子NF-k B p65的荧光情况,初步探讨健脾益肺方对ALS模型小鼠小胶质细胞活化调控作用及相关机制。方法:1.将hSOD1—G93A转基因小鼠随机分为:生理盐水组、低浓度健脾益肺方组、中浓度健脾益肺方组和高浓度健脾益肺方组;同窝普通野生型小鼠设为阴性对照组。每组小鼠6只。模型小鼠按分组予生理盐水或对应浓度健脾益肺方灌胃,阴性对照组予等量生理盐水灌胃。每日灌胃一次。2.测定小鼠体重,通过Weydt评分确定发病时间及生存期,通过悬尾试验、衣架悬挂试验、疲劳转棒试验等评价运动功能。统计分析各组间差异。3.各组小鼠终末期经取材、固定、冰冻切片后,进行免疫荧光染色。正置荧光显微镜×40倍物镜下观察并拍照。利用Image J软件测定前角NeuN阳性细胞计数、CD11b阳性活化小胶质细胞计数及NF-κB p65荧光强度核/浆比。统计分析各组间差异。结果:1.体重变化治疗前,生理盐水组和低浓度、中浓度、高浓度健脾益肺方组模型小鼠体重差异没有统计学意义(P>0.05)。治疗后,前期四组模型小鼠的体重随时间均呈增加趋势,增加幅度基本无差异。16周龄开始,各组体重差异具有统计学意义(P<0.01)。与生理盐水组模型小鼠比较,低浓度健脾益肺方组体重差异无统计学意义(P>0.05);中浓度、高浓度健脾益肺方组模型小鼠体重下降幅度明显延

关 键 词： 健脾益肺方 肌萎缩侧索硬化 转基因小鼠 小胶质细胞

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