导　　师： 杨春涛;刘真

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广州医科大学

摘　　要： 背景：　　晚期糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)堆积是糖尿病（Diabetes mellitus,DM）皮肤并发症的重要原因。丙酮醛（Methyglyoxal,MGO）是一种活性二羰基化合物，是AGEs产生的重要中间体，在糖尿病的病理过程中能生成AGEs。N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)是某些临床常用药的主要活性成分，参与内源性还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）和硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）的生成。然而，NAC可否通过抑制AGEs的产生或其毒性，减轻DM诱导的皮肤损伤仍鲜有报道。因而，本研究旨在观察NAC对MGO诱导的糖尿病性皮肤细胞损伤的影响及分子机制。　　方法：　　应用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测糖尿病患者和健康志愿者血浆中AGEs的含量。用牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）与MGO于37℃孵育3 d制备AGEs。根据AGEs具有自发荧光和形成棕色溶液的特点，分别用荧光酶标仪检测340/465 nm反应体系中荧光强度以及观察BSA与MGO混合溶液的颜色;进一步观察NAC对MGO诱导的AGEs生成的影响。　　人永生化角质形成细胞（Human adult low calcuim kertinocytes,HaCaT）给予MGO处理，模拟糖尿病血液或组织中高MGO状态，建立糖尿病皮肤伤口愈合障碍的体外模型。从细胞活力、线粒体膜电位、细胞的粘附和迁移功能、炎症因子的分泌、核因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）亚基p65的核转位、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase9,MMP-9）的表达以及细胞外基质的含量进行评价。在MGO处理HaCaT细胞前，用NAC预处理1 h，观察NAC对MGO诱导的上述指标改变的影响，以明确其皮肤细胞保护效应。　　最后，通过检测AGEs的受体（receptor for advanced end products,RAGE）的表达，以及其中和抗体（Neutralizing antibody against RAGE,N-ABR）预处理对MGO诱导的HaCaT细胞损伤的影响，�

关 键 词： 糖尿病 丙酮醛 乙酰 半胱氨酸 晚期糖基化终末产物 皮肤角质形成细胞 伤口愈合障碍

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