导　　师： 刘革修

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的:研究双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)协同达沙替尼(Dasatinib,Das)对肝癌细胞的抑制作用以及探索DHA降低肝癌细胞化疗抵抗的分子机制,为晚期肝癌患者提供一种安全有效的治疗方案。方法:CCK8法检测药物(DHA或/和Das)对HepG2的细胞毒性。平板克隆形成实验检测HepG2细胞的增殖及克隆形成能力;划痕实验检测HepG2细胞的迁移能力。流式细胞术检测HepG2的细胞周期变化和凋亡情况以及细胞内超氧化物阴离子型ROS的含量和线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;此外,还采用形态学观察法和吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法观察和检测细胞的凋亡。为了进一步地研究DHA增加HepG2细胞化疗敏感性的机制,采用Western blot检测相关蛋白表达量的变化。为了研究DHA的化疗增敏性和FOXC1基因的关系,采用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)技术检测FOXC1 mRNA的表达量,CCK8法检测蛋白酶体抑制剂硼替佐米处理后的药物共处理组(DHA和Das)细胞的活性以及Western blot检测FOXC1蛋白表达量的变化。结果:DHA(0~50μmoL/L)和Das(0~200 nmoL/L)对HepG2细胞的毒性具有浓度依赖性;DHA 10μmoL/L和Das 70 nmoL/L分别单独处理对HepG2细胞毒性比较小(减少的细胞活性约为20%),且与对照组相比细胞活性有显著差异,二者联合处理显示出协同抗肿瘤的作用(减少的细胞活性为55.02%±2.53%)。克隆形成实验的结果显示共处理组的细胞克隆数量少且集落小,划痕实验的结果则显示药物的共处理几乎完全抑制了细胞的迁移。此外,流式细胞术的结果显示DHA和Das共处理48h明显地诱导Hep G2细胞周期的G0/G1期阻滞(DHA:Das:Co-treated=49.59%±0.96%:54.55%±0.97%:61.12%±1.74%),显著地促使细胞内ΔΨm下降(36h)且诱导更多的细胞凋亡(DHA:Das:Co-treated=15.81%±2.72%:14.65%±1.21%:60.24%±2.57%);形态学观察法和AO/EB染色法的结果与流式细胞术的结果一致;同时经流式细胞�

关 键 词： 双氢青蒿素 协同 达沙替尼 化疗 增敏性 肝癌 蛋白酶体

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