导　　师： 何小维

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 白介素6作为一种多功能细胞因子以及炎症标志物,参与了体内多种反应,在人体的健康中扮演着重要的角色,是应用于感染性疾病早期诊断筛查的一个重要手段。因此血液中白介素6含量的测定对炎症反应、感染性疾病、肿瘤等多种疾病的诊断及治疗有着重要的指导作用。目前有多种白介素6的检测方法研究,较为常用的是化学发光方法以及ELISA方法,但是此类方法的仪器设备昂贵,且需要专业操作人员使用。本研究使用的荧光定量免疫层析方法是基于免疫学原理的定量检测方法,具有快速、操作简便、成本低的特点,应用前景广。本实验制备了白介素6免疫荧光胶乳,并使用场发射扫描电镜、动态光散射、Zeta电位对制备的白介素6免疫荧光胶乳的稳定性进行分析,结果显示:在活化剂用1-乙基-碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺,活化时间为15 min,缓冲体系选择2-(N-吗啉代)乙磺酸,偶联时间为2μL-6抗体浓度为0.6mg/mL,缓冲体系pH值为5.5的条件下,白介素6和纳米荧光微球的偶联率最高;场发射扫描电镜、动态光散射、Zeta电位的结果表明,白介素6免疫荧光胶乳的稳定性比原纳米荧光微球的稳定性有所提高。实验在ELISA和荧光定量免疫层析平台对抗原和抗体进行配对筛选,并对荧光定量免疫层析平台进行条件优化,结果表明:筛选最佳抗原为B1,最佳配对抗体为标记A3和包被A2,膜上最佳包被抗体A2浓度为0.5mg/mL,喷量为2μL/cm,待测样本与样本稀释液的比例为75:100,包被膜的干燥时间为48 μL-6免疫荧光胶乳和喷垫工作稀释液的稀释比例为1:10,喷垫工艺选择喷量为4μL/cm平行喷3行,层析反应时间为15min。在标准品的测定下,标准曲线线性关系良好,R~2=0.99954,检测限和定量限分别为8.494 pg/mL、25.2789 pg/mL,添加回收实验测得其回收率平均值分别为96.51%、102.46%,103.06%,对应的变异系数分别为9.

关 键 词： 白介素 免疫荧光胶乳 荧光定量免疫层析 快速检测

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