导　　师： 杜晓东

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东海洋大学

摘　　要： 贝壳基质蛋白(ShellMatrixProteins,SMPs)是贝壳形成的主要参与者和功能执行者，在有机框架构建和矿物沉积过发挥重要作用。本课题组前期通过对马氏珠母贝(Pinctadafucatamartensii)贝壳基质蛋白质组分析，获得了棱柱层SMPs。本研究对其中的5个SMPs基因进行全长克隆，并通过qRT-PCR、原位杂交(ISH)、RNAi和原核表达技术进行功能验证。结果如下：　　1、β-N-乙酰-己糖胺酶(Beta-hexosaminidase/Beta-N-acetylhexosaminidase,HEX)属于糖苷水解酶20家族(GH20)，是几丁质代谢的关键水解酶。几丁质作为有机框架主要成分，其代谢在贝壳矿化中发挥重要作用。本研究克隆获得2个β-N-乙酰-己糖胺酶基因PmHEX和PmHEXL。PmHEX全长3813bp，编码1141个氨基酸;PmHEXL全长2760bp，编码774个氨基酸;二者均含有两个典型的GH20和GH20b结构域和一个碳水化合物结合结构域(CHB-HEX)。QRT-PCR分析表明PmHEX和PmHEXL在外套膜边缘区(ME)和套膜区(MP)均显著高表达，ISH检测显示PmHEX和PmHEXL均主要定位于边缘区外褶和套膜区的外侧上皮细胞。RNAi干扰后，PmHEX在外套膜边缘区和套膜区的表达量均显著下调(P<0.05);且贝壳棱柱层和珍珠层微观结构都出现不同程度的紊乱。因此，PmHEX参与了贝壳棱柱层和珍珠层的形成。　　2、几丁质结合蛋白在与几丁质特异性结合、钙化调控等过程发挥重要作用。通过克隆获得马氏珠母贝几丁质结合蛋白(Chitinbindingprotein,CBP)PmCBP基因全长序列6367bp，编码2044个氨基酸，包含20个典型的ChtBD2结构域(CBDs)，且ChtBD2结构域在物种间具有较高的保守性。QRT-PCR分析表明PmCBP在外套膜套膜区表达量最高(P<0.05);ISH分析显示PmCBP基因主要分布于外套膜套膜区外侧上皮细胞。RNAi干扰后，PmCBP在外套膜套膜区的表达量显著下调，且贝壳珍珠层结构生长紊乱。相关性分析发现PmCBP的表达水平与壳重和壳长呈正相关(P<

关 键 词： 马氏珠母贝 贝壳基质蛋白 棱柱层 原核表达

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