导　　师： 黄东阳

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 汕头大学

摘　　要： 选择性剪接是指在一个pre-mRNA中通过不同的剪接模式（在不同的剪接位点上进行剪接组合）以此产生不同mRNA剪接异构体的过程。选择性剪接可以使一个基因表达出多种蛋白，是维持基因表达和蛋白质组多样性重要机制，剪接过程受多种顺式作用元件和反式作用因子相互作用调节。过往对于选择性剪接的研究多集中于剪接因子的调控和RNA的转录与加工（如RNAPolⅡ的延伸速率）。而近些年的研究表明表观遗传学修饰可调控选择性剪接，如组蛋白修饰与DNA甲基化，甚至可以与自然反义转录（naturalantisensetranscripts,NATs）相关。自然反义转录本是一组编码蛋白质或非编码蛋白质的RNAs，其他(有义)转录物具有互补序列,可以调节有义链的表达。　　白细胞共同抗原CD45分子（PTPRC）是由一类结构相似且相对分子量较大的跨膜蛋白组成，具有激活酪氨酸激酶去磷酸化活性的功能，其在细胞发挥信号传导与相关功能调节时发挥重要作用。CD45mRNA外显子的不同剪接与保留方式，能特异性地编码CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO等共计8种不同的蛋白亚型。CD45不同亚型的表达与淋巴细胞的功能息息相关，且随着细胞的发育、分化与激活、各亚型之间可相互转换，这与自身免疫性疾病、多发性骨髓瘤等疾病的发病相关。　　CD45基因存在自然反义转录本，为研究ASCD45对正义亚型的调控作用。本实验首先通过PMA（佛波酯）处理HuT78细胞、Jurkat细胞、RPMI8226细胞在体外刺激淋巴细胞活化，建立活化的淋巴细胞模型，定量PCR结果表明ASCD45与CD45正义链RO亚型表达存在正相关系;通过RNAi干扰ASCD45，结果显示CD45RO亚型表达减少，提示CD45自然反义转录本可调控CD45正义链的选择性剪接。为进一步探讨反义RNA调控CD45亚型表达的机制，通过亚硫酸盐处理的甲基化PCR测序检测CD45基因CG富集

关 键 词： 淋巴细胞 选择性剪接 分子 自然反义转录本 甲基化 调控机制

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