导　　师： 林立

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 汕头大学

摘　　要： 肿瘤细胞死亡能够引起炎症的发生，形成一个持续性的炎性肿瘤微环境，有利于肿瘤细胞增殖和转移。同时，它可以通过抗原呈递细胞摄取肿瘤抗原，刺激机体的抗肿瘤免疫。前者是典型的细胞焦亡的特性，后者更多在细胞凋亡中发生。许多引起凋亡的细胞因子，目前研究的已经很深入了，但是调控细胞焦亡的因子，现在仍然是未知的。　　KIF11是一个有丝分裂的驱动蛋白，主要功能是调节中心体分开和纺锤体形成。在恶性的肿瘤细胞中，KIF11的表达水平很高，抑制KIF11的功能，会导致细胞发生凋亡。先前的研究发现，表达显性负的KIF11(尾巴的结构)，会导致细胞死亡，但是这种细胞死亡形式，并没有激活caspase-3。同时，检测到KIF11有两个caspase-1的酶切位点。因此，我们探究了KIF11在参与细胞焦亡中的作用。实验使用CRISPER-CAS9的基因编辑方法构建了293TKIF11+/-细胞系，慢病毒转染KIF11-RFP的融合蛋白，构建稳定表达的293TKIF11过表达的细胞系。首先发现，用不浓度的星胞菌素处理三种细胞系，导致细胞凋亡。但是在三种细胞间没有发现什么差异。表明不同的KIF11水平的293T细胞对于凋亡的刺激不敏感。为了引起细胞焦亡，我们共转染了RIPK2和caspase-1,在共聚焦显微镜下观察三种细胞形态学的变化。表明在293TKIF11低表达的细胞中，caspase-1引起的细胞死亡形式是焦亡。相反，我们看到在293TWT和293TKIF11高表的细胞中，caspase-1引起的细胞外囊泡结构的产生，形成一个beads-on-a-string的特殊凋亡体结构。最后这些凋亡体的GFP露出细胞外。表明细胞在发生凋亡之后，紧接着会发生二次坏死。为了验证细胞焦亡，检测培养液中的LDH的释放，293TKIF11+/-、293TWT、293TKIF11-RFP，三种细胞的LDH的水平分别是46.9%、17.8%、6%。实验结果表明，在293TKIF11+/-细胞系中，LDH的水平

关 键 词： 蛋白 细胞 肿瘤微环境 细胞焦亡 凋亡机制