导　　师： 吴娴波;张宝

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的：　　肠道病毒71型(EV71)是手足口病的主要病原体之一，由EV71引起的手足口病大部分表现为轻微症状，但仍有部分患者的病情进展为重症神经系统疾病，并引起脑干脑炎，急性弛缓性麻痹，肺水肿和心肺功能衰竭，有较高的病死率。由于目前没有有效预防或治疗EV71的药物和疫苗，虽有进入临床试验的药物或疫苗，但很难广泛应用于人群，仍需继续对EV71感染的机制进行深入研究以探索新的针对EV71的药物靶点。　　细胞自噬(autophagy)是在真核生物中高度保守的过程，降解长寿命蛋白及衰老细胞器以实现再循环利用，发生在细胞正常生长发育、分化的生理过程中，病原体感染时也会引起自噬的发生。由于在免疫过程中的作用，自噬往往被病原体所利用以逃逸免疫，自噬体膜也可能被病原体重构以利于其复制。相关研究通过体内外实验证明了EV71感染可诱导自噬并促进EV71复制，但其具体分子机制仍未明确。EV71病毒的VP1蛋白位于病毒最外部的部分，能够结合宿主细胞表面受体来协助病毒感染，具有重要的研究意义，VP1蛋白与宿主细胞蛋白存在复杂的相互作用。因此，本研究考虑VP1蛋白可能参与了EV71诱导自噬的调控机制。故提出猜想:EV71病毒通过其VP1蛋白参与自噬的调控和执行过程。　　方法：　　1.EV71诱导的自噬的检测　　采用Western Blot技术，检测自噬的生物标志物LC3的转化;构建RD-GFP-RFP-LC3细胞株，通过荧光显微镜对荧光自噬颗粒进行检测。使用qPCR技术检测自噬抑制后的病毒含量，验证EV71病毒复制过程是否需要自噬。　　2.构建EV71VP1表达载体，探索VP1蛋白是否参与EV71诱导的自噬　　将VP1蛋白构建于pEGFP-N1，在表达载体转染后，采用qPCR技术检测自噬相关的基因，采用Western Blot技术检测自噬相关蛋白，验证EV71VP1蛋白是否参与EV71诱�

关 键 词： 手足口病 病理机制 肠道病毒 型 病毒复制 细胞自噬

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