导　　师： 袁建辉

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 深圳大学

摘　　要： 在前期研究中,本课题组首次发现:具有强致腹泻能力的奇异变形杆菌C02011株含有VirB型IV型分泌系统(T4SS)。亲缘关系谱分析表明,此结构与肺炎克雷伯菌和大肠埃希氏菌T4SS毒力岛上的VirB最为相近。我们结合前期研究成果及已有文献报道,推测该奇异变形杆菌具有的此分泌系统可能与其它病原菌具有的T4SS一样具有增强其毒力的功能。在一些菌株中,VirB9基因是T4SS毒力岛上的通道蛋白,对于T4SS分泌毒力因子起到至关重要的作用。因此,我们选取T4SS毒力岛上的VirB9基因进行研究,探讨该基因对增强奇异变形杆菌毒力作用究竟如何?为此,我们通过二次同源重组技术成功构建了C02011株的VirB9基因缺失株及VirB9基因缺失后的回补株,并进行了下述一系列实验。体外实验:首先,我们应用菌株C02011对三种常见肠道上皮细胞模型的黏附和侵袭特性成功筛选出奇异变形杆菌易感细胞模型Caco-2,并找出其最佳感染复数(MOI)和时间(h)。接下来,我们对野生株、VirB9基因缺失株及其缺失后的回补株进行了革兰氏染色、生长曲线测定、菌落形态及群游现象观察,初步分析了VirB9基因的功能。最后,我们应用此模型及细菌黏附和侵袭细胞的特性,分析比较了C02011株与其它来源奇异变形杆菌(无T4SS)及其VirB9基因缺失株、缺失后的回补株的致病能力。体内实验:我们选择Balb/c小鼠进行研究。首先,我们通过C02011(含有T4SS)、B02005(不含有T4SS)和生理盐水对照三个组间的比较,以粪便含水量、结肠长度、病理切片及评分为评价指标,成功构建出致腹泻奇异变形杆菌Balb/c小鼠敏感模型。接下来,我们针对已构建的腹泻动物模型对奇异变形杆菌C02011株、C02011的VirB9缺失株、VirB9缺失后的回补株进行了炎性因子水平初步检验,符合预期结果(C02011株>ΔVirB9回补株>VirB9缺失株)。通过上述实验结果,我们认为T4SS毒力

关 键 词： 奇异变形杆菌 细胞模型 动物模型 致病性

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