导　　师： 夏虹

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 骨肉瘤是一种好发于儿童和青少年的原发性恶性骨肿瘤，早期肺转移是其预后不佳的主要原因。因此，寻找骨肉瘤侵袭转移新靶点及新机制对骨肉瘤防治至关重要。研究发现，miR-195在骨肉瘤细胞中的表达趋势与其转移潜能呈反向相关，上调miR-195表达活性可促进骨肉瘤细胞凋亡并抑制其侵袭和迁移;脂肪酸合成酶(fatty acid synthase，FASN)在骨肉瘤组织中呈高表达状态，并且其表达水平与肺部转移呈正相关，体外沉默FASN能够抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和转移;DNA异常甲基化反向调控起抑癌基因作用的miRNAs的表达对于骨肉瘤发病和转移起着重要作用。然而miR-195与FASN基因之间是否存在靶向调控并参与骨肉瘤侵袭转移以及DNA异常甲基化是否是miR-195表达的上游调控机制目前报道尚少。　　目的：　　1.检测新鲜骨肉瘤组织以及正常骨组织中miR-195和FASN表达水平，以及miR-195DNA启动子区甲基化水平，为研究甲基化修饰miR-195激活FASN促进骨肉瘤转移提供组织学依据。　　2.探讨miR-195分子靶向调控FASN基因对骨肉瘤细胞体外侵袭转移的影响。　　3.探讨miR-195分子启动子区的甲基化调控是影响骨肉瘤细胞体外侵袭迁徙的机制之一。　　材料和方法：　　一、miR-195在新鲜骨肉瘤组织中的表达情况及其甲基化水平　　选取临床组织活检获取的新鲜骨肉瘤组织标本以及正常新鲜骨组织各6例，分别采用RT-PCR检测miR-195表达程度、western blot法检测FASN表达活性以及MSP法检测miR-195DNA启动子区甲基化水平。　　二、miR-195分子靶向调控FASN基因对骨肉瘤细胞体外侵袭转移的影响。　　1.采用生物信息学预测miR-195与FASN之间可能的作用位点，然后用荧光海肾素酶报告基因检测技术进一步证实二者之间的靶向调控作用。　　2.构建miR-195过表达及抑制载体，转染人骨肉瘤细胞不同�

关 键 词： 骨肉瘤 病理机制 小分子核糖核酸 甲基化修饰 细胞恶性表型

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