导　　师： 杨慧兰

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus,HSV)是人类疱疹病原体,包括单纯疱疹Ⅰ型(HSV-1)和单纯疱疹Ⅱ型(HSV-2),其中HSV-2为人类生殖器疱疹(Genital Herpes,GH)的主要病原体。HSV-2初次感染后可在神经元建立终身潜伏,潜伏期只有潜伏相关转录本(Latency-assistant transcript,LAT)可被大量检测。CTCF(CTCF-binding factor)是广泛存在于真核生物的多功能转录因子,可结合在不同靶序列上发挥调控功能。HSV-1病毒LAT基因周围存在多个CTCF结合位点,已有研究表明CTCF的结合与解离可能在HSV-1的潜伏与复发过程中发挥作用。HSV-2与HSV-1有很高的同源性,但在LAT基因周围序列却存在较大差异,CTCF在HSV-2中是否也参与调控病毒的潜伏再激活有待研究。该课题是为了研究CTCF结合位点在HSV-2潜伏再激活过程中的作用。首先运用生物信息学分析HSV-2全基因组结构,并且依据CTCF结合序列的特点,检索并对比了CTCF结合序列在HSV-1与HSV-2全基因组中的区别。然后通过Jaspar数据库以及CTCF结合序列频次分析,得到可能的CTCF结合位点。最后通过扩增预测位点,构建pGL3-promoter-CTCF binding motifs重组载体,转染人胚胎肾细胞(293T)后进行双荧光检测实验,研究预测序列的转录调控效应。该课题预测得到三个CTCF结合位点,分别位于潜伏相关转录本(LAT)上游(CTUL)、下游(CTa’m)及内含子(CTRL)上。成功构建重组载体后,双荧光检测结果显示,LAT内含子(pGL3-promoter-CTRL)及LAT下游(pGL3-promoter-CTa’m)重组载体转染组与pGL3-promoter载体转染组相比,荧光强度明显减弱,差异有统计学意(P<0.001),然而LAT上游结合位点重组载体(pGL3-promoter-CTUL)转染组与pGL3-promoter相比无明显差异(P>0.05)。由此得出HSV-2 LAT序列的上游,内含子及下游序列上存在可能的CTCF结合位点,其中LAT内含子及下游的预测结合序列具有减弱基因启动子功能的效应。该研究初步预测了CTCF蛋白在HSV-

关 键 词： 型单纯疱疹病毒 潜伏复发机制 基因表达调控

领　　域： []