导　　师： 李海红;林常敏

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 汕头大学

摘　　要： 目的：l、研究体内三维（three-dimensional,3D）重构外泌汗腺中明细胞、暗细胞、肌上皮细胞、导管部内层细胞和外层细胞分化时间过程的差异，探讨与正常胚胎发育过程中汗腺细胞分化的相似性和差异性;2、探索体内3D重构外泌汗腺的血管营养和神经支配情况，并与人体外泌汗腺的血管营养、神经支配进行比较;3、通过抑脂质子密度加权MRI序列技术检测体内3D重构外泌汗腺液体分泌功能。　　方法：1、将获取的人全层皮肤标本去除皮下脂肪，以2mg/mlⅡ型胶原酶消化分离汗腺，挑取出完整的线圈状汗腺进行汗腺细胞原代培养。当汗腺细胞达70%-80%融合时，去除汗腺组织后收集细胞制成细胞悬液，将细胞悬液与Matrigel混合均匀，皮下注射至21只正常的成年无胸腺裸鼠腹股沟皮下进行体内3D培养。在注射后第2、3、4、5、6、8和12周的时间点，每个时间点处死3只裸鼠，完整取出胶栓，固定、石蜡包埋、切片。HE（hematoxylinandeosin，HE）染色和免疫荧光染色检测分泌细胞特异性抗原细胞角蛋白7(Cytokeratin7，K7)、明细胞特异性抗原碳酸酐酶Ⅱ（CarbonicanhydraseⅡ，CAⅡ）、暗细胞特异性抗原巨大囊肿病液体蛋白-15（Grosscysticdiseasefluidprotein-15，GCDFP-15）、肌上皮细胞特异性抗原α平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscleactin，?-SMA）、导管内层细胞特异性抗原S100钙结合蛋白P（S100CalciumBindingProteinP，S100P）和导管外层细胞特异性抗原S100钙结合蛋白A2（S100CalciumBindingProteinA2，S100A2）的表达，明确体内3D重构汗腺不同细胞分化时间过程，并与人在体汗腺发育进行比较分析。2、正常成年无胸腺裸鼠分两组，汗腺细胞+Matrigel组和单纯Matrigel组：将混合均匀的含有汗腺细胞的Matrigel和单纯Matrigel注射至裸鼠腹股沟皮下进行体内3D培养。10周后处死裸鼠，取出胶栓，4%多聚甲醛固定、石蜡

关 键 词： 外泌汗腺 三维重构 细胞分化 血管营养 神经支配 液体分泌

领　　域： []