导　　师： 曾其毅

学科专业： J0202

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 研究背景脓毒症是高发病率和高致死率疾病。胃肠道一方面是脓毒症最常见的受累器官,另一方面,胃肠功能障碍本身可引起或者加重脓毒症,因肠道屏障受损,肠道内细菌等物质可跨过黏膜屏障进入机体循环,诱导多脏器功能障碍。极化液具有抗炎等作用,主要活性成份为胰岛素。解偶联蛋白2(UCP2)在胃肠道广泛表达,最新的研究表明,它在脓毒症时表达上调,可增加游离脂肪酸的合成,通过顺序活化蛋白激酶B(PKB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、NLRP3/ASC/Caspase1信号通路,诱导促炎反应。研究目的评估胰岛素对脓毒症相关小肠上皮功能障碍的作用,了解UCP2在其中的作用。研究方法构建体内及体外两种脓毒症模型。体内模型选用SD大鼠,采用盲肠结扎穿孔(CLP)方法构建,分为空白组、假手术组、CLP处理组、CLP+极化液(GIK)治疗组、CLP+糖钾液(GK)治疗组。研究内容包括72小时大鼠死亡率、血清IL-1β/TNF-α水平、回肠组织IL-1β/TNF-α/IL-6/IL-10水平、回肠组织上皮病理HE染色结果(Chiu’s评分法)、回肠组织渗透性变化(血清FD-4法)、回肠组织紧密连接蛋白ZO-1/Occludin/Claudin-1表达水平、回肠组织UCP2和NLRP3 mRNA情况、回肠组织UCP2、NLRP3和Caspase1 p10蛋白表达水平。体外模型采用人结直肠腺癌细胞株(Caco2)构建。体外细胞渗透性采用单层肠上皮细胞模型渗透性实验。采用Oug/ml、O.1ug/ml、1.0ug/ml、10ug/ml、100ug/ml不同浓度的脂多糖(LPS)溶液处理Caco2细胞,研究单层肠上皮细胞模型渗透性大小、UCP2和p-p38MAPK蛋白表达水平;100ug/mlLPS溶液预处理Caco2细胞,其后给予1.Onmol/ml、10nmol/ml、100nmol/ml的胰岛素治疗,24小时后研究单层肠上皮细胞模型渗透性大小、UCP2和p-p38 MAPK蛋白表达水平。研究结果1、胰岛素能够降低脓毒症大鼠死亡率,降低脓毒症大鼠的血清促炎因子beta IL-1 和 alphaTNF 水平;2、胰岛素能够降低脓毒症大鼠回肠组织炎症水平,缓解肠道上皮组织损害;3、胰岛素能够降低脓毒症大鼠回肠屏障功能损害,增加脓毒症大鼠回肠肠道上皮紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1和Occludin的表达水平;4、胰岛素可以降低UCP2和NLRP3 mRNA相对表达量,诱导UCP2蛋白、NLRP3蛋白和Caspase1 p10蛋白表达下调;5、不同浓度LPS刺激Caco2细胞,Caco2细胞单层肠上皮细胞模型渗透性呈浓度依赖性增加,UCP2和p-p38 MAPK蛋白呈浓度依赖性表达上调;6、不同浓度胰岛素刺激LPS预处理的Caco2细胞,Caco2细胞单层肠上皮细胞模型渗透性呈浓度依赖性下降,UCP2和p-p38 MAPK蛋白呈浓度依赖性表达下调。研究结论胰岛素可以降低CLP诱导的脓毒症模型全身炎症水平及死亡率,缓解回肠上皮组织炎症水平及病理损害,增加回肠上皮组织紧密连接蛋白的表达并增强回肠上皮组织屏障功能,主要机制可能涉及UCP2蛋白表达下调,并抑制下游的p38 MAPK 和 NLRP3/ASC/Caspase1 信号通路的激活。更多还原

关 键 词： [964755]胰岛素 [2797674]脓毒症 小肠上皮屏障功能障碍 [4923548]解偶联蛋白2

分 类 号： [R459.7]

领　　域： []